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DNA实验

RNA酶保护实验(RNase Protection Assay,RPA)简介

2024-09-21 DNA实验 加入收藏
简介: RNA酶保护试验(RNase Protection Assay,RPA)是通过液相杂交的方式,用反义RNA探针与样品杂交,以检测RNA表达的技术。1.

简介: RNA酶保护试验(RNase Protection Assay,RPA)是通过液相杂交的方式,用反义RNA探针与样品杂交,以检测RNA表达的技术。

1. 原理:双链RNA(杂交的)能够抵抗RNA酶的降解。

2. 应用:检测RNA表达

3. 与Northern杂交和RT-PCR比较,RPA有以下几个优点:

(1) 检测灵敏度比Northern杂交高。由于Northern杂交步骤中转膜和洗膜都将造成样品和探针的损失,使灵敏度下降,而RPA将所有杂交体系进行电泳,故损失小,提高了灵敏度。

(2)由于PCR扩增过程中效率不均一和反应“平台”问题,基于PCR产物量进行分析所得数据的可靠性将下降,而RPA没有扩增过程,因此,分析的数据真实性较高。

(3)由于与反义RNA探针杂交的样品RNA仅为该RNA分子的部分片段,因此,部分降解的RNA样品仍可进行分析。

(4)步骤较少,耗时短。与Northern杂交相比,省去了转膜和洗膜的过程。

(5)RNA-RNA杂交体稳定性高,无探针自身复性问题,无须封闭。

(6)一个杂交体系中可同时进行多个探针杂交,无竞争性问题。

(7)检测分子长度可以任意设置,灵活性大。

4. RPA的缺点是需要同位素标记探针。


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