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DNA实验

快速TA克隆的突破

2024-09-26 DNA实验 加入收藏
快速TA克隆的突破T载体是TA克隆载体的简称,就是利用载体的T末端和PCR产物的A末段连接而将目的基因克隆到载体中的方法。目前市场上常见的T载体,根据连接方法可

快速TA克隆的突破

T载体是TA克隆载体的简称,就是利用载体的T末端和PCR产物的A末段连接而将目的基因克隆到载体中的方法。

目前市场上常见的T载体,根据连接方法可以分成两种:

方法1、以T4连接酶进行连接的方法,这种方法的载体有promega、takara;

可以说这两家公司将这两种方法发挥到了很高的水平,转化子比较多,阳性率也不错,唯一的不足就是连接的时间长。因为连接时间越长效率越高,要达到较好的连接效率,一般要过夜连接。国内很多公司模仿这种方法制作T载体,不仅连接时间也很长,而且做不到promega、takara的阳性率和稳定性。

方法2、以拓扑异构酶(TOPO)进行连接的方法,最早采用这种连接方法的是INVITROGEN(英俊公司),并且申请了专利,这种方法的优势是快速连接,在 5-15分钟就可以将目的基因克隆到载体中,阳性率比较高,这种方法国内也有人模仿,照理说,这种载体能迅速的替代promega、takara。

但是为什么promega、takara的载体销售还是主流呢?

那就要说一下拓扑异构酶这种连接方法的缺点:

1、长片段的连接效率很低,大于1.5K的片段用这种方法连接效率很低;

2、转化子少,虽然阳性率高,但是转化子少;

3、稳定性比较差,拓扑异构酶对温度很敏感,运输的温度和连接的温度都会影响,用水浴锅控制连接温度因为温度误差比较大就很难连接,必须用PCR仪;

4、经常会测序无信号,从测序公司的反馈,这种载体经常会导致T7启动子丢失,测序无信号,必须换引物才能测序。

这两种方法各有优缺点,有没有一种T载体能够兼备两种方法的优点,而克服两种方法的缺点呢?

一直致力于生物技术原创技术开发的百泰克公司新近推出的PUM-T载体兼具两种方法的优点,不仅提高了连接效率和阳性率,而且连接时间仅仅需要10-15分钟,即使难以连接的长片段DNA(1.5K以上)的连接效率也远远超过TOPO克隆的方法,极大的方便了生物科研工作者的研究,节约了时间提高了效率!

工欲善其事,必先利其器!磨刀不误砍柴工!我们期待更多的致力于技术原创 的生物公司能够带来更多方便的产品,更多国内的生物技术公司能够逐渐占领生物技术的高地,在给我们带来方便的同时,也降低了整个行业的科研成本,让我们科研工作者有限的资金能发挥更大作用,做更多的研究,为生物技术的发展做出更多的贡献!


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