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DNA实验

鼠卵细胞DNA的提取

2024-09-28 DNA实验 加入收藏
一、试剂: TNE : 10mmol/L Tris cL (ph 8.0) 100 mmol/L NaCl 1 mmol/L EDTA 10%的SDS 酚、氯仿

一、试剂: TNE : 10mmol/L Tris cL (ph 8.0) 100 mmol/L NaCl 1 mmol/L EDTA 10%的SDS 酚、氯仿、乙醇 二、操作步骤: (1)收集鼠卵细胞,PBS 漂洗3次; (2)将细胞悬浮于500 ul的TNE缓冲液中; (3)加入6 ul20mg/ml蛋白酶K和50ul10%SDS,轻缓摇动; (4)37℃保存1-4小时; (5)加入等体积250ul饱和酚和氯仿,轻摇15-20分钟,1200rpm离心5分钟,用大口径吸管转移上清; (6)用2倍体积的乙醇(室温),轻摇至DNA出现; (7)12000rpm离心10 min,20ul TE溶解。 个人心得: 1. 卵细胞与一般的培养细胞系明显不同,收集卵细胞后一般都是在显微镜下计数细胞的个数,常常只有几十个或上百个细胞,所以裂解前要尽量少带其它液体。 2. 卵细胞表面的颗粒细胞等要去除干净。消化时用的胰酶或透明酯酸酶要尽量去除。

一、小鼠卵细胞的收集(适用于 昆明小鼠,BALB/c) 1、第一天PM5:30 7.5IU PMSG注射,第三天PM5:30 即48小时后,7.5IUHCG注射,第四天8:30即15小时后,杀鼠取卵子;用0.1%胰酶去处透明带; 二、卵细胞培养有关的培养基: 1、M2和TYH      M2       TYH   NaCl     553.4      697.6   KCl    35.6      35.6   CaCl2 H2O    25.1      25.1   KH2PO4    16.2      16.2   MgSO4 7H2O    29.3      29.3   NaHCO3    33.6      210.6   HEPES    500.5         Lactic acid(Sodium salt)    435.2(60%的溶液0.39ml)         Pyruvic acid(Sodium salt)    3.6      11   Glucose    100.2      100.2   BSA    400      400   庆大霉素    20000IU(500ul)      20000IU(500ul)   用去离子水做溶剂,配完要过滤,整个过程要无菌操作。M2和TYH用之前要预温,培养卵时TYH应做成液滴预温2小时 2 、CZB 单位(mg/100ml) NaCl 447.0 KCl 36.0 CaCl22H2 O 25.0 KH2PO4 16.1 MgSO4 7 H2 O 29.1 NaHCO3 211.1 60%乳酸钠 0.58ml 丙酮酸钠 3.0 BSA 500 青霉素 6.0 链霉素 5.0 1%酚红 100ul4.1 EDTA Na2 4.1


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