鼠卵细胞DNA的提取

一、试剂： TNE ： 10mmol/L Tris cL (ph 8.0) 100 mmol/L NaCl 1 mmol/L EDTA 10%的SDS 酚、氯仿、乙醇 二、操作步骤： （1）收集鼠卵细胞，PBS 漂洗3次； （2）将细胞悬浮于500 ul的TNE缓冲液中； （3）加入6 ul20mg/ml蛋白酶K和50ul10%SDS，轻缓摇动； （4）37℃保存1-4小时； （5）加入等体积250ul饱和酚和氯仿，轻摇15-20分钟，1200rpm离心5分钟，用大口径吸管转移上清； （6）用2倍体积的乙醇（室温），轻摇至DNA出现； （7）12000rpm离心10 min，20ul TE溶解。 个人心得： 1. 卵细胞与一般的培养细胞系明显不同，收集卵细胞后一般都是在显微镜下计数细胞的个数，常常只有几十个或上百个细胞，所以裂解前要尽量少带其它液体。 2. 卵细胞表面的颗粒细胞等要去除干净。消化时用的胰酶或透明酯酸酶要尽量去除。

一、小鼠卵细胞的收集（适用于 昆明小鼠，BALB/c） 1、第一天PM5：30 7.5IU PMSG注射，第三天PM5：30 即48小时后，7.5IUHCG注射，第四天8：30即15小时后，杀鼠取卵子；用0.1%胰酶去处透明带； 二、卵细胞培养有关的培养基： 1、M2和TYH      M2       TYH   NaCl     553.4      697.6   KCl    35.6      35.6   CaCl2 H2O    25.1      25.1   KH2PO4    16.2      16.2   MgSO4 7H2O    29.3      29.3   NaHCO3    33.6      210.6   HEPES    500.5         Lactic acid(Sodium salt)    435.2(60%的溶液0.39ml）         Pyruvic acid(Sodium salt)    3.6      11   Glucose    100.2      100.2   BSA    400      400   庆大霉素    20000IU(500ul)      20000IU(500ul)   用去离子水做溶剂，配完要过滤，整个过程要无菌操作。M2和TYH用之前要预温，培养卵时TYH应做成液滴预温2小时 2 、CZB 单位(mg/100ml) NaCl 447.0 KCl 36.0 CaCl22H2 O 25.0 KH2PO4 16.1 MgSO4 7 H2 O 29.1 NaHCO3 211.1 60%乳酸钠 0.58ml 丙酮酸钠 3.0 BSA 500 青霉素 6.0 链霉素 5.0 1%酚红 100ul4.1 EDTA Na2 4.1