SDS碱裂解法小量提取小麦基因组DNA

1、取0.1~0.2 g左右小麦叶片于1.5 ml的Eppendorf离心管中，将离心管直接放入盛液氮的冰壶中冷冻。从冰壶中取出离心管，用小玻璃研棒直接插入离心管中迅速研磨，至淡黄色粉末为宜；

2、向离心管中加入600 ml的DNA提取缓冲液S，振荡充分混匀，65 ℃水浴30 min，其间温和混匀几次；

提取缓冲液“S”配制：

3、加入等体积的酚-氯仿（V/V=1：1）温和混匀，8000 rpm，4 ℃离心10 min；

4、取出离心管，吸上清液移入另一干净离心管中，加入等体积的氯仿混匀后8000 rpm，4 ℃离心10 min；

5、取上清，加入2/3体积预冷的异丙醇，温和混匀，静置5~10 min，勾出絮状的DNA沉淀，用70%的乙醇洗2~3次，无水乙醇洗1次，然后置于通风厨中自然风干或冷冻抽干机抽干；

6、根据DNA量的多少，加入20~100 靗 ddH2O或TE充分溶解；

7、增加体积至600 ml，加入1.8 ml RNaseA（10 µg/μl），37 ℃温浴30 min；

8、重复步骤（3）和（4），取出上清液，加入1/10体积3 mol/L醋酸钠及二倍体积冷的无水乙醇，轻轻混匀，静置一段时间后勾出DNA，用70%的乙醇清洗2~3次，无水乙醇洗1次，真空抽干或吹干；

9、根据DNA量的多少，加入20~100 μl ddH2O或TE充分溶解。用紫外分光光度计测量DNA的浓度，1.0%琼脂糖电泳测定DNA纯度。