临床样品基因组DNA小量抽提标准操作规程(SOP)

目的：

1.从人或动物血液中抽提DNA 。

2.从体液，唾液，尿液中抽提DNA 。

3.从人体组织，切片和各种临床样品中抽提DNA 。

4.抽提出的DNA 可以用于PCR及相关诊断。

原理：

临床常常需要从各种生物组织或细胞中抽提基因组DNA ，用于病症的辅助性分析和诊断。样品根据试剂盒（SK1341试剂盒，上海生工）提供的方法进行处理，然后在特定的DCL Buffer中用Protenase K和去污剂裂解。用UNIQ-10柱吸附样品中基因组DNA 。UNIQ-10能选择性吸附DNA ，而不吸附蛋白质和其它非核酸类物质。经简单的洗涤步骤，样品DNA 可用Elution Buffer回收。抽提出的DNA 可以用于PCR及相关诊断。

样品准备：

1.血液：

① 血液收集：血液必须用ACD(0.48% Citric Acid，1.32% Sodium Citrate，1.47% Glucose)抗凝。6ml血液用1ml ACD抗凝。因为从用肝素抗凝血液中抽提的DNA 常有PCR抑制剂存在，不能用于PCR反应。血液4℃可以存放2周左右，-20℃可以放置1~2月。

② 由于红细胞和血小板不含细胞核，血液中的DNA 主要来源于白细胞和血液中的病毒等。通常从200µl血液中可获约2~4µg DNA 。如果需要较大量的DNA ，可以用500µl血液。处理方法如下：500µl血液中加入1ml无菌水，5,000转/分，离心2分钟去上清。用200µl TE将白细胞悬浮起来备用。

③ 新鲜血样品如不能立即用于抽提DNA ，可置于4℃，但不要超过2个星期。欲长期储存，请分装成200µl/管，储存于-20℃。

2.血清

最好使用新鲜血清样品，否则样品应分装成200μl/管，-20℃保存。

3.生物组织：

① 5~30mg组织样品用手术刀切成小块，在液氮中碾碎。

② 将粉末收集到1.5-ml离心管中，用200µl TE悬浮。

4.石蜡生物组织：

① 25~30mg石蜡生物组织样品用手术刀切成小块，转入2-ml离心管（用户自备）中。

② 加入1.2ml二甲苯溶剂（用户自备）。用振荡器振荡。（目的是除去石蜡）

③ 用台式高速离心机，12,000转/分，室温离心5分钟。

④ 小心移走上清，注意不要移走沉淀物质。

⑤ 加入1.2ml无水乙醇，小心用振荡器振荡，室温放置1分钟。

⑥ 室温，12,000转/分，离心5分钟。

⑦ 重复步骤④~⑥一次以除去残留的二甲苯溶剂。

⑧ 打开离心管盖，小心弃上清，37℃保温10~15分钟以除去残留的乙醇。

⑨ 样品用200μl TE 悬浮。

5.生物体液：

① 将体液转移到离心管中，根据体液的性质，确定体液的用量。如果体液的体积小于200μl，可以直接使用。

② 5,000 转/分，室温离心10分钟。

③ 小心移走上清，沉淀用200μl TE悬浮。