大规模制备和浓缩反转录病毒原液实验（离心法）

1.  将产病毒细胞按1：10或1：20从刚生长汇片的细胞分传至20~50个10 cm 培养皿中，培养细胞至50%~90%汇片。

2.  弃去培养液，轻轻加入半量的培养液，注意培养液碱性不要过大，培养2~3天。

 

3.  收取上清，用0.45 μm 的滤器过滤，贮存于-70℃或-80℃，或马上进行滴定和浓缩。

 

4.  滴定病毒原液。

 

5.  对于大体积病毒原液，用无菌的250 ml 离心瓶和JA-14转子在4℃，25 000 g 离心20 min，对于小体积的病毒原液，用SW-27或SW-41Ti转子20 000 r/min 离心10 min。使用前，用70%乙醇淋洗离心管以防细菌污染。

 

6.  将上清直接倒入消毒的离心瓶中，用JA-14转子14 000 r/min 离心5~16 h，或用SW-27或SW-41Ti转子20 000 r/min 离心2 h。

7.  离心在4℃进行，小心除去上清，用原病毒体积，0.1%~1%的DMEM-10重悬沉淀。

 

8.  将病毒分装成5~50 μl 的小份，贮存于-70℃或-80℃。滴定经浓缩的或未经浓缩的病毒各1份。