质粒DNA的提取

在制作酶谱、测定序列、制备探针等实验中需要高纯度、高浓度的质粒DNA，为此需要大量提取质粒DNA。大量提取的质粒DNA一般需进一步纯化,常用柱层析法和氯化绝梯度离心法。

碱法

1、取培养至对数生长后期的含pBS质粒的细菌培养液250ml，4℃下5000g离心15分钟，弃上清，将离心管倒置使上清液全部流尽。

2、将细菌沉淀重新悬浮于50ml用冰预冷的STE中（此步可省略）。

3、同步骤1方法离心以收集细菌细胞。

4、将细菌沉淀物重新悬浮于5ml溶液I中，充分悬浮菌体细胞。

5、加入12ml新配制的溶液II，盖紧瓶盖，缓缓地颠倒离心管数次，以充分混匀内容物，冰浴10分钟。

6、加9ml用冰预冷的溶液III，摇动离心管数次以混匀内容物,冰上放置15分钟，此时应形成白色絮状沉淀。

7、4℃下5000g离心15分钟。

8、取上清液，加入50ml RNA酶A(10mg/ml)，37℃水浴20分钟。

9、加入等体积的饱和酚/氯仿，振荡混匀，4℃下12000g离心10分钟。

10、取上层水相，加入等体积氯仿,振荡混匀，4℃下12000g离心10分钟。

11、取上层水相，加入1/5体积的4mol/L NaCl和10% PEG(分子量6000)， 冰上放置60分钟。

12、4℃下12000g离心15分钟，沉淀用数ml 70%冰冷乙醇洗涤，4℃下12000g离心5分钟。

13、真空抽干沉淀，溶于500ml TE或水中。