细菌基因组DNA的微量提取法

本方法通过SDS裂解细胞，蛋白酶降解蛋白，CTAB去除多糖成分

一:仪器

同方法一

二:试剂

TE、TAE缓冲液;10%SDS;5MNaCL;

20mg/ml蛋白酶K;CTAB/NaCL溶液(10% CTAB，0.7M NaCL 4.1gNaCL 溶于80ml水中，缓慢加入10gCTAB，加热溶解);25/24/1，酚/氯仿/异戊醇; 24/1，氯仿/异戊醇;异丙醇;70%及100%乙醇

三:操作

1.5ml 对数生长期细菌细胞

离心，5000rpm，1min

沉淀

溶于500μl TE缓冲液中混匀

30μl 10%SDS，3μl蛋白酶K，混匀，37℃，1小时

100μl NaCL(5M) 混匀

80μl的CTAB/NaCL，*混匀;65℃ 10min(可不做)

加入等体积酚/氯仿/异戊醇混合液，混匀，离心12000rpm，4-5min。

取上清，以下操作与方法一中有机溶剂抽提、沉淀、干燥、除RNA 、复溶等步骤一致。

注意

1，*此步操作后，离心管中NaCL的浓度不应低于0.5M，否则DNA将与CTAB共沉淀。

2，本法适用于从多糖含量高的样品中提取DNA。对于菌体样品，通过此流程，可以获得较为完整的DNA分子。