silica回收DNA片段
1、在长波紫外灯下切下含有目标DNA的琼脂糖凝胶, 用纸巾吸干凝胶表面的液体并切小。计算凝胶的重量。2、加入2-3倍体积的6M KI或NaI(避光4度保存)。3
1、在长波紫外灯下切下含有目标DNA的琼脂糖凝胶, 用纸巾吸干凝胶表面的液体并切小。计算凝胶的重量。
2、加入2-3倍体积的6M KI或NaI(避光4度保存)。
3、温浴, 间断混合,直到凝胶熔化。
4、加适量的振匀的silica悬液(10ul)充分混匀, 冰上放置15分钟(或更长),间断混合。
5、离心3分钟, 弃上清。
6、加1ml预冷的NEW buffer(先用100ul打散沉淀,再用900ul混匀),冰上 洗盐2 分钟,间断混合。
7、离心10s,弃上清。
8、重复6,7步骤1次。
9、于50 ℃烘箱烘干。
10、加10ul的去离子水用枪头打匀,65 oC水浴15分钟,间断混匀。
离心10 s,把上清转移到另外洁净的离心管中
跑胶检测回收效率
注意事项
* 4----8步均在冰上操作,防止解吸附,silica只在低温下对DNA有吸附作用。
* NEW Buffer:(100ml)
去离子水加至100ml.(-20度保存)
* Silica配法见: