创造新的酶切位点

将互相匹配的DNA末端连接起来可以产生新的酶切位点。这些DNA末端可以通过以下方法获得： 1. 补平5′突出的粘性末端产生平末端 2. 双酶切产生的平末端 3. 双酶切产生的互相匹配的粘末端 用上述方法获得的相互匹配末端，经连接产生的DNA片段中通常含有新的酶切位点。

补平5'突出的粘性末端，产生新的酶切位点 下表中列出了通过补平5′突出的粘性末端，连接后所产生的新的酶切位点。以下组合是通过计算机程序计算出来的，尽管我们希望能尽量保证其准确性，但有些未经实验证实，因此不能保证100%的可行性。 本表没有列出识别序列不够严谨的限制性内切酶(例如识别多个序列的酶)。如果有同裂酶存在，则只列出其中的一个酶。本表中列出的内切酶均为已商品化的内切酶。 例：        EcoRI 片段                                                                  XmnI 和 AseI 位点                 5´...G           AATTC...3´          补平并连接 →         3´...CTTAATTAAG...5´                 3´...CTTAA           G...5´                                             5´...GAATTAATTC...3´

注：加粗字体 标注的酶识别6或8个碱基的序列。上标的数字表明识别序列的长度(例如 AscI 8 = 8-base cutter)。 括号里的酶表示新的序列仍然能被原来的酶切割。 上角标 2 表明补平并连接后可以产生2个相同的识别序列。例如，补平并连接AflII后将产生CTTAATTAAG序列，其中包含2个MseI序列(TTAA)。