细胞名称   Mcf-7/ADR；人乳腺癌阿霉素耐药细胞株

生长特性   贴壁

培养条件   RPMI-1640+10%FBS+1%P/S+500ng/mlADR

培养环境   37℃   5% CO2，,95% AIR

传代比例   1:2 传代，2~3 天换液

冻存条件   90%FBS+10%DMSO

QC 检测    支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性 

1、细胞传代： 

1）细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 25cm2培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次； 

2）添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入 5ml 完全培养 液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至 15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min； 

3）弃上清，沉淀细胞用 1-2ml 完全培养基重悬，然后按 1:2 比例进行分瓶传代，最后放入 37℃，5%CO2细胞 培养箱中培养； 

2、细胞冻存： 

1）细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 25cm2培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次； 

2）添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终 止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至 15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min； 

3）用适量的冻存液（FBS：DMSO=9 ：1）重悬细胞，并放置于冻存管中； 

4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜，24h 后转入液氮中进行长期保存。使用程序 降温盒可直接放入-80℃。  

3、细胞复苏：

1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结 晶，然后用 75%的酒精擦拭冻存管外壁； 2）将冻存管中的细胞移至含 6ml 完全培养基的 15ml 离心管中， 1000rpm 离心 5min； 

3）弃上清，沉淀用 6ml 完全培养基重悬，接种 25cm2培养瓶，于 37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；