小鼠肺上皮MLE-12细胞

 细胞特性

1） 来源：小鼠肺

2） 形态：上皮细胞样

3） 含量：>1x106 个/mL

4） 污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

5） 规格：T25 瓶或者 1mL 冻存管包装

运输和保存：可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式：（1）干冰运输，收到后

立即转入液氮或者-80 度冰箱冻存或直接复苏；（2）存活细胞，收到后应继续生

长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

收到细胞后请拍照，3 天内如果发现污染，请及时拍照与我们联系。

细胞用途：仅供科研使用。

细胞接收后的处理：

1）收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。

2）请先在显微镜下确认细胞生长状态，酒精消毒瓶壁并将 T25 瓶置于 37℃培养

约 2-3h。

3）T25 瓶中的培养基取出离心后，去上清，添加 6ml 新的完全培养基，重新加

入原 T25 培养瓶。

4）如果细胞长满 90%请及时进行细胞传代，传代培养用本公司附带的完全培养

基。

细胞培养步骤

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备 D/f12 培养基；优质胎牛血清，2-5%；胰岛素 0.005mg/ml, 双抗，1%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37 摄氏度。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二． 细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，离

心管加入 4mL 培养基混合均匀。在 800-1000RPM 条件下离心 4-5 分钟，弃去

上清液，补加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入 T25 培养瓶中

培养，补加培养基至 6ml。

2） 细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。

1. 将上清取出，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培

养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部

分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量完全培养基

终止消化。

3. 轻轻打匀后吸出，和上清一起在 1000RPM 条件下离心 5 分钟，弃去上清

液，加 1-2mL 培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按 1：

2 到 1:4 比例分到新的含 6ml 培养基的新皿中或者瓶中。3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；

1，细胞冻存时，取出上清，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆脱落

后，加入 1ml 完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

2，4min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加

入血清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度 1-2xE6/ml，每支冻存

管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻存管做好标识。

3，将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，至少 2 个小时以后转入液

氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

注意事项：

1. 收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立

即与我们联系。

2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注

意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。