人类免疫缺陷病毒直接检测方法

人类免疫缺陷病毒直接检测方法包括抗原检测、核酸检测、病毒分离培养等，直接检测病毒的存在。病毒分离培养一般不作为常规诊断。

人类免疫缺陷病毒直接检测方法的基本原理是在一些特殊情况下，当抗体检测无法满足 HIV 感染诊断的需要时，如：处于窗口期的 HIV 感染者，机体尚未产生抗体，可以通过测定血清中 p24 抗原进行辅助诊断。

器材：酶标仪等。

人类免疫缺陷病毒直接检测方法的基本过程可分为如下几步：

（一）1．HIV-1 抗原检测

A 通常采用夹心法 EIA（enzyme immunoassay，EIA），即将纯化的已知抗体包被在固相反应板孔底，当加入待测血清后，若血清中含有 p24 抗原则与包被抗体形成抗原-抗体复合物，再加入辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）标记的 HIV 抗体，在抗原上又结合了酶标记的抗体，加底物显色后，在酶标仪上读结果。

为提高检测血清中 p24 抗原的敏感性，将血清中免疫复合物解离（immune-complex disassociate，ICD）后再进行测定，发展了 ICD p24 抗原测定试剂，用于 HIV p24 抗原测定。

（二）HIV 核酸检测

应用 PCR 技术检测外周血淋巴细胞中 HIV 的前病毒 DNA 序列，或用反转录 PCR（RT-PCR）法检测血浆中游离 HIV RNA。HIV 核酸检测有定性和定量两类：

A HIV 核酸定性测定：定性检测用于 HIV 感染的辅助诊断，HIV 核酸检测阴性，只可报告本次实验结果阴性，不可排除 HIV 感染，HIV 核酸检测阳性，可作为诊断 HIV 感染的辅助指标，不单独用于 HIV 感染的诊断。

检测方法为商品化试剂盒和实验室自建方法，商品化试剂盒应严格按说明书操作；实验室自建方法使用反转录 PCR（RT-PCR）法时包括核酸提取、反转录合成 cDNA，PCR 扩增反应、扩增产物分析等步骤。

B HIV 核酸定量测定：对感染或患者体内游离病毒核酸 RNA 含量的定量测定。HIV 核酸定量检测的意义：监测 HIV 感染者的病程进展、HIV 感染早期诊断以及抗病毒治疗效果等。目前常用定量 RT-PCR 检测血浆（清）标本中 HIV RNA 的拷贝数或国际单位来表示（c/ml 或 IU/ml），亦称病毒载量（virus load），即患者血浆（清）中 HIV RNA 的数量，比 CD4+ T 细胞计数更能反映抗病毒治疗效果。目前使用的病毒载量测定技术主要基于靶核酸扩增 RT-PCR 和信号放大扩增两种方法。测定结果小于最低检测限时，注明最低检测限水平。低于最低检测限的结果不能排除 HIV 感染。

HIV RNA 水平测定应避免在患者急性感染期（如细菌性肺炎、结核感染、卡氏肺孢子菌肺炎等）和免疫接种期进行，因此时（2~4 周）血浆 HIV RNA 可升高。血浆 HIV RNA 的测定应在同一实验室用同一方法进行，并在决定开始治疗或调整方案时重复验证。