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微生物学

人类免疫缺陷病毒直接检测方法

2024-04-17 微生物学 加入收藏
简介人类免疫缺陷病毒直接检测方法包括抗原检测、核酸检测、病毒分离培养等,直接检测病毒的存在。病毒分离培养一般不作为常规诊断。原理人类免疫缺陷病毒直接检测方法的基

简介

人类免疫缺陷病毒直接检测方法包括抗原检测、核酸检测、病毒分离培养等,直接检测病毒的存在。病毒分离培养一般不作为常规诊断。

原理

人类免疫缺陷病毒直接检测方法的基本原理是在一些特殊情况下,当抗体检测无法满足 HIV 感染诊断的需要时,如:处于窗口期的 HIV 感染者,机体尚未产生抗体,可以通过测定血清中 p24 抗原进行辅助诊断。

材料与仪器

器材:酶标仪等。

步骤

人类免疫缺陷病毒直接检测方法的基本过程可分为如下几步:

(一)1.HIV-1 抗原检测

A 通常采用夹心法 EIA(enzyme immunoassay,EIA),即将纯化的已知抗体包被在固相反应板孔底,当加入待测血清后,若血清中含有 p24 抗原则与包被抗体形成抗原-抗体复合物,再加入辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)标记的 HIV 抗体,在抗原上又结合了酶标记的抗体,加底物显色后,在酶标仪上读结果。

为提高检测血清中 p24 抗原的敏感性,将血清中免疫复合物解离(immune-complex disassociate,ICD)后再进行测定,发展了 ICD p24 抗原测定试剂,用于 HIV p24 抗原测定。

(二)HIV 核酸检测

应用 PCR 技术检测外周血淋巴细胞中 HIV 的前病毒 DNA 序列,或用反转录 PCR(RT-PCR)法检测血浆中游离 HIV RNA。HIV 核酸检测有定性和定量两类:

A HIV 核酸定性测定:定性检测用于 HIV 感染的辅助诊断,HIV 核酸检测阴性,只可报告本次实验结果阴性,不可排除 HIV 感染,HIV 核酸检测阳性,可作为诊断 HIV 感染的辅助指标,不单独用于 HIV 感染的诊断。

检测方法为商品化试剂盒和实验室自建方法,商品化试剂盒应严格按说明书操作;实验室自建方法使用反转录 PCR(RT-PCR)法时包括核酸提取、反转录合成 cDNA,PCR 扩增反应、扩增产物分析等步骤。

B HIV 核酸定量测定:对感染或患者体内游离病毒核酸 RNA 含量的定量测定。HIV 核酸定量检测的意义:监测 HIV 感染者的病程进展、HIV 感染早期诊断以及抗病毒治疗效果等。目前常用定量 RT-PCR 检测血浆(清)标本中 HIV RNA 的拷贝数或国际单位来表示(c/ml 或 IU/ml),亦称病毒载量(virus load),即患者血浆(清)中 HIV RNA 的数量,比 CD4+ T 细胞计数更能反映抗病毒治疗效果。目前使用的病毒载量测定技术主要基于靶核酸扩增 RT-PCR 和信号放大扩增两种方法。测定结果小于最低检测限时,注明最低检测限水平。低于最低检测限的结果不能排除 HIV 感染。

注意事项

HIV RNA 水平测定应避免在患者急性感染期(如细菌性肺炎、结核感染、卡氏肺孢子菌肺炎等)和免疫接种期进行,因此时(2~4 周)血浆 HIV RNA 可升高。血浆 HIV RNA 的测定应在同一实验室用同一方法进行,并在决定开始治疗或调整方案时重复验证。


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