EBV-转化人淋巴细胞

 一、细胞培养条件

细胞英文名称:CAM191

细胞中文名称:EBV-转化人淋巴细胞

形态特性:淋巴母细胞样

生长特性:悬浮

培养体系:1640+10%FBS

传代方法:传代情况

冻存条件:细胞库无血清冻存液

二、细胞收到后处理

细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的最

好办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用 75%酒精喷洒整个瓶

消毒后放到超净台内，严格无菌操作。镜下观察：未超过 80%汇合度时，可将瓶

装的完全培养液移入废液缸中，悬浮细胞需离心处理，加入 6ml 新鲜完全培养基，

放入 37℃、5%CO2 孵箱培养；超过 80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体

操作见细胞培养步骤。

三、细胞培养步骤

1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入

5mL 培养基混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 5 分钟，弃去上清液，补加 1-2mL

培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入

6cm 皿中，加入约 6ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。1、对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM 条件下离心 8-10 分钟，弃去上清液，补加 1-2mL

培养液后吹匀，将细胞悬液按 1：2 到 1：5 的比例分到新的含 8ml 培养基的新皿

中或者瓶中。

方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬

液按 1：2 到 1：3 的比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃

去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，进行离心收集，1000RPM 条件下离

心 8-10 分钟，去除上清，按冻存数量加入细胞库推荐的无血清冻存液。

PS：若客户收到 2ml 小管细胞，收到细胞后，用 75%酒精喷洒整个管子消毒后放

到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至 T25 培养瓶或 6cm 培

养皿，加入 5ml 左右完全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若

密度未超过 80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过 80%，可直

接进行传代（方法同上）。