NK-92（人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞）
NK-92（人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞）基本信息：
NK-92是从一位患有急进性非霍奇金淋巴瘤的50岁白人男性外周血单核细胞衍生来的一株白细胞介素-2依赖型NK细胞株。NK-92MI是转染得到的源自NK-92的IL-2非依赖的NK细胞株，亲本细胞通过微粒体基因转化法用逆转录病毒MFG-hIL-2载体携带的人IL-2cDNA进行转化。可能由于载体整合到基因组DNA中，转化是稳定的。这株细胞对很多恶性细胞有细胞毒性；铬释放试验显示它能杀死K562和Daudi细胞。 NK-92（人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞）有以下特征：CD2,CD7,CD11a,CD28,CD45,CD54表面标记阳性，
NK-92（人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞）特性：
1）来源：50 years
2）形态：淋巴母细胞
3）含量：>1x106 个/mL
4）污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装
运输和保存
可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式
（1）干冰运输，收到后立即转入液氮冻存或直接复苏；
（2）存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
（3）收到细胞后请拍照，3天内如果发现污染，请及时拍照与我们联系。
NK-92（人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞））用途：仅供科研使用。
细胞接收后的处理：
1） 收到细胞后，请检查发货培养瓶的状况，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。
2） 在显微镜下确认细胞生长状态时，最好在低倍镜（4或5X物镜)下进行，能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X和20×物镜下，同时给刚收到的细胞拍照，（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为细胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。
3） 观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h。
4） 贴壁细胞：在运输过程中贴壁细胞会有脱落的现象，如发现贴壁细胞有脱落或者脱落后抱团生长，可将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和未贴壁细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到加有按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基的原培养瓶中（或新的培养瓶中）。
5） 悬浮细胞：T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中（加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基）。
6）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后第一次传代建议1：2传代 。
NK-92（人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞）培养步骤
一．NK-92（人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞）培养基及培养冻存条件准备：
1）MEMα+0.2mM Inositol+0.1mM β-mercaptoethanol+0.02mM Folic Acid+100-200U/ml recombinant IL-2+12.5% HS+12.5% FBS+1% P/S
2）培养条件：Atmosphere: Air, 95%; CO2, 5%，Temperature: 37℃。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。
4）Medium Renewal：every 2 to 3 days
5）Antigen Expression：CD2＋, CD7＋, CD11a＋, CD28＋, CD45＋, CD54＋, CD56＋, CD1 -,CD3 -, CD4 -, CD5 -, CD8 -, CD10 -, CD14 -, CD16 -, CD19 -, CD20 -,CD23 -, CD34 -, HLA- DR –
6）Applications：transfection and can be used effectively for immunological ex vivo purging of leukemia from blood without compromising hematopoietic cell function.
一． NK-92（人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞）培养注意事项：
1. NK-92和NK-92MI细胞均为悬浮生长，大部分细胞聚集成团，少数分散的细胞，并且细胞间隙会有较多的死细胞和细胞碎片；
2. NK-92和NK-92MI细胞对营养需求很高，建议使用进口胎牛血清和马血清培养，白介2的质量对NK-92的生长影响很大，正常培养时换液周期为2天，建议使用半量换液和离心换液交替进行，即半量换液1-2次后离心全量换液一次，尽量减少离心次数；
3. 细胞生长时聚集的细胞团会逐渐增大，正常的细胞团显微镜下为白色透亮的，若细胞聚集太多，出现细胞团中部发暗时可在换液后将细胞团轻轻摇散，或者用移液器轻轻吹散，吹打力度不可过大，否则会出现大量死细胞和细胞碎片。这个细胞没有聚团的活性很低。细胞对营养要求也很高，千万不能团块太大营养不足，不然48小时细胞就会死亡。这个细胞计数是不准确的 因为细胞成团长，团块不可能吹散计数，还有就是散落的细胞细胞活性不好，所以细胞检测活性也是不准确的。
4. 运输条件可能会对细胞造成一定的影响，收到细胞后请按以下方法处理：
a) 收到细胞后静置，显微镜下观察细胞并拍照，主要找聚集的细胞团；
b) 将培养瓶竖置，静置4~6h，肉眼观察大部分细胞团都沉到底部后，将多余的培养基轻轻倒入50ml离心管中离心收集一部分细胞，底部留3~4ml（剩余20ml左右时可换用移液器吸取上清，保证大部分细胞团留在瓶中），补加3~4ml新鲜培养基进行培养，若细胞量较多可分两瓶，离心收集的细胞也可单独接种培养；
c) 细胞对机械损伤特别敏感，所以最好是不要离心
5. 细胞复苏时不能离心处理，提前准备一个离心管，加10ml培养基，把溶解后的冻存细胞接入，静置2小时左右，细胞都沉降在底部，去上清，用完全培养基接到T25培养瓶内进行培养
二．细胞处理：
1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
下面T25瓶为例；
1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。明舟生物（mingzhoubio）按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。
3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
培养细胞请注意
(1)传代时细胞的接种密度应控制在 1万-4万 活细胞/平方厘米。
(2)选用高质量的胎牛血清配制培养液。
