微生物学

单链高分子量的担体DNA制备（酵母转化实验）

2024-05-09 微生物学加入收藏

一、简介转化（transformation）是某一基因型的细胞从周围介质中吸收来自另一基因型的细胞的DNA而使它的基因型和表型发生相应变化的现象。这现象首先发现

一、简介

转化（transformation）是某一基因型的细胞从周围介质中吸收来自另一基因型的细胞的DNA而使它的基因型和表型发生相应变化的现象。这现象首先发现于细菌，也是细菌间遗传物质转移的多种形式中最早发现的一种，它不同于通过噬菌体感染传递遗传物质的转导以及通过细菌细胞的接触而转移DNA的细菌接合。

二、操作方法

单链高分子量的担体DNA制备

三、材料与仪器

DNA

TE 酚氯仿乙酸钠乙醇
超声波发生器

步骤

1. 将DNA溶于pH8.0的1×TE缓冲液，终浓度为10 mg/ml。于4℃搅拌过夜。

2. 用一个大的超声探头，在75%的满功率下超声处理DNA 30 s，以降低DNA溶液的粘度。取1 μg DNA在0.8%琼脂糖凝胶上电泳，检查超声剪切后片段大小的分布。如有必要，可重复超声处理，直到获得适当的片段大小分布。片段大小范围在2~15 kb 之间，平均大小约为7 kb 是合适的。

3. 用缓冲液平衡酚抽提1次，酚/氯仿抽提1次，最后用氯仿抽提1次。

4. 加入1/10体积的3 mol/l，pH5.2的乙酸钠缓冲液，2.5体积的冰冷的100%乙醇沉淀DNA。

5. DNA沉淀用2×TE缓冲液重悬，最终浓度10 mg/ml。

6. 将担体DNA移至一个Pyrex耐热玻璃烧瓶中，在微波炉中加热煮沸2~3 min。

7. 迅速置冰浴中冷却，用无菌试管等量分装后于-20℃冻存DNA。