SDS-PAGE凝胶制实验及其各实验试剂的配制方法
SDS-Page 凝胶制备属于实验室最常规的操作了，刚开始做蛋白实验总是在找凝胶配制实验中所用试剂的配方，这里总结了分离胶、浓缩胶、分离胶和浓缩胶缓冲液、考马斯
SDS-Page 凝胶制备属于实验室最常规的操作了，刚开始做蛋白实验总是在找凝胶配制实验中所用试剂的配方，这里总结了分离胶、浓缩胶、分离胶和浓缩胶缓冲液、考马斯亮蓝染液、样品缓冲液、电泳缓冲液等配方。
1. 分离胶(12%)
| 配制 | 所需试剂 | 所需体积 |
| 分离胶(12％) | 30％丙烯酰胺 | 6.0 ml |
| 1.5 mol/l Tris-HCl | 3.8 ml | |
| 10%SDS | 150 μl | |
| 10%过硫酸铵 | 150 μl | |
| TEMED | 6 μl | |
| 蒸馏水 | 4.9 ml |
2. 浓缩胶(5%)
| 配制 | 所需试剂 | 所需体积 |
| 浓缩胶(5％) | 30％丙烯酰胺 | 1.3 ml |
| 1.5 mol/l Tris-HCl | 1.0 ml | |
| 10%SDS | 80 μl | |
| 10%过硫酸铵 | 80 μl | |
| TEMED | 8 μl | |
| 蒸馏水 | 5.5 ml |
3. 分离胶缓冲液(pH8.9)
| 配制 | 所需试剂 | 所需体积 |
| 分离胶缓冲液 | Tris | 36.6 g |
| 1 mol/l HCl | 48 ml | |
| 蒸馏水 | 补足至100 ml | |
4. 浓缩胶缓冲液(pH6.7)
| 配制 | 所需试剂 | 所需体积 |
| 浓缩胶缓冲液（pH6.7） | Tris | 5.98 g |
| 1 mol/l HCl | 48 ml | |
| 蒸馏水 | 补足至100 ml | |
5. 30%丙烯酰胺(pH≤7.0)
| 配制 | 所需试剂 | 所需体积 |
| 30%丙烯酰胺（pH≤7.0） | 丙烯酰胺 | 29 g |
| 甲叉-双丙烯酰胺 | 1 g | |
| 蒸馏水 | 补足至100 ml | |
6. 10%过硫酸铵(W/V)：1g过硫酸铵溶于10ml水中，4℃保存数周，尽量现用现配。
7. 10%SDS：将10 g SDS溶于80ml重蒸水中并轻缓搅拌(室温低时需水浴加热溶解)，再定容至100ml，室温存放。
8. 样品缓冲液
| 配制 | 所需试剂 | 所需体积 |
| 样品缓冲液 | 1 M Tris-HCl（pH6.7） | 5 ml |
| SDS | 2.5 g | |
| 巯基乙醇 | 1 ml | |
| 溴酚兰 | 0.05 g | |
| 蔗糖 | 10 g | |
| 蒸馏水 | 补足至100ml |
9. 考马斯亮蓝染色液：0.25g考马斯亮蓝R-250用少量甲醇溶解后，用甲醇(40ml)-乙酸(10ml)水溶液稀释至100ml。
10. Tris-甘氨酸电泳缓冲液(pH8.3)
| 配制 | 所需试剂 | 所需体积 |
| Tris-甘氨酸 电泳缓冲液（pH8.3） | Tris碱 | 15.1 g |
| 甘氨酸 | 94 g | |
| 10％（W/V）SDS | 50 ml | |
| 去离子水 | 补足至100 ml | |
凝胶配制所需试剂的母液不能放置太久，有条件的实验室可将母液保存在4度冰箱中，放置母液被微生物 污染或者出现沉淀。
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