微生物学

人脐静脉细胞融合细胞（EA.hy926）

2024-11-21 微生物学加入收藏

人脐静脉细胞融合细胞（EA.hy926）人脐静脉细胞融合细胞（EA.hy926）介绍:在PEG胁迫下，将原代培养的人脐静脉细胞与抗硫鸟嘌呤的A549克隆株融合，

人脐静脉细胞融合细胞（EA.hy926）

人脐静脉细胞融合细胞（EA.hy926）介绍:在PEG胁迫下，将原代培养的人脐静脉细胞与抗硫鸟嘌呤的A549克隆株融合，构建了人脐静脉细胞株, EA.hy926。融合子在HAT培养基上生长并以八因子相关抗原筛选。人脐静脉细胞融合细胞（EA.hy926）已经过100次以上的群体倍增(PDLs)。电镜照片显示Weibel-Palade小体的细胞质分布以及组织特异性的细胞器，分化的内皮细胞特性如血管生成，体内平衡/血栓形成，血压及炎症反应。 [PubMed: 6407019]

人脐静脉细胞融合细胞（EA.hy926）特性:

1）来源：体细胞融合细胞

2）形态：内皮细胞样，贴壁生长

3）含量：>1x106 个/mL

4）污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

5）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

运输和保存

可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式

（1）干冰运输，收到后立即转入液氮或者-80度冰箱冻存或直接复苏；

（2）存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

（3）收到细胞后请拍照，3天内如果发现污染，请及时拍照与我们联系。

人脐静脉细胞融合细胞（EA.hy926）用途：仅供科研使用。

细胞接收后的处理：

1）收到细胞后，请检查发货培养瓶的状况，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。

2）在显微镜下确认细胞生长状态时，最好在低倍镜（4或5X物镜)下进行，能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X和20×物镜下，同时给刚收到的细胞拍照，（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为细胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。

3）观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h。

4）贴壁细胞：在运输过程中贴壁细胞会有脱落的现象，如发现贴壁细胞有脱落或者脱落后抱团生长，可将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和未贴壁细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到加有按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基的原培养瓶中（或新的培养瓶中）。

5）悬浮细胞：T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中（加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基）。

6）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议1：2传代。

人脐静脉细胞融合细胞（EA.hy926）培养步骤

一．人脐静脉细胞融合细胞（EA.hy926）培养基及培养冻存条件准备：

1）准备DMEM培养基；优质胎牛血清，10%；双抗1%。

2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。