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微生物学

人组织细胞淋巴瘤细胞(U-937)

2024-11-22 微生物学 加入收藏
人组织细胞淋巴瘤细胞(U-937)人组织细胞淋巴瘤细胞(U-937)介绍:人组织细胞淋巴瘤细胞(U-937)是由Nilsson K实验室于1974年从一名37岁

人组织细胞淋巴瘤细胞(U-937)

人组织细胞淋巴瘤细胞U-937介绍:人组织细胞淋巴瘤细胞U-937是由Nilsson K实验室于1974年从一名37岁的患有恶性组织细胞性淋巴瘤的白人男性的胸水中分离建立的。1979年来的研究显示该细胞在人混合淋巴细胞培养物上清、佛波酯、Vit D3γ-IFNTNF和维A酸的诱导下可以向终末单核细胞分化。该细胞不合成免疫球蛋白,EBV阴性;可产生溶菌酶、β-2-微球蛋白,受PMA刺激后可产生TNF-α;表达C3R;可作转染宿主;表达Fas,对TNF和抗Fas的抗体敏感。

人组织细胞淋巴瘤细胞U-937特性

1 来源:淋巴瘤

2 形态:单核细胞,悬浮生长

3 含量:>1x106

4 污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

5 规格:T25瓶或者1mL冻存管包装

运输和保存

可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式

1)干冰运输,收到后立即转入液氮或者-80度冰箱冻存或直接复苏;

2)存活细胞,收到后应继续生长,传代达到细胞生长状态良好时,再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

3)收到细胞后请拍照,3天内如果发现污染,请及时拍照与我们联系。

细胞接收后的处理:

1 收到细胞后,请检查发货培养瓶的状况,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。

2 在显微镜下确认细胞生长状态时,最好在低倍镜(45X物镜)下进行,能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X20×物镜下,同时给刚收到的细胞拍照,(10×20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为细胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。

3 观察好细胞状态后,75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h

4 贴壁细胞:在运输过程中贴壁细胞会有脱落的现象,如发现贴壁细胞有脱落或者脱落后抱团生长,可将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,然后抽出瓶中的培养基和未贴壁细胞1000rpm离心5分钟,弃去上清重悬后接种到加有按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基的原培养瓶中(或新的培养瓶中)。

5 悬浮细胞T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟,弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中(加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基)。

6)备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞  收到细胞后第一次传代建议12传代 

人组织细胞淋巴瘤细胞U-937用途:仅供科研使用。                       

人组织细胞淋巴瘤细胞U-937培养操作规程,供参考

一.培养基及培养冻存条件准备:

1 准备1640培养基;优质胎牛血清,10%;双抗,1%

2 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5% 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%

3 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。

二. 细胞处理:

1 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。

将细胞悬液按121:5比例分到新皿中或者瓶中,补加培养基至6ml,放入培养箱继续培养。第一次传代推荐传代密度为1:2

3细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。

下面T25瓶为例;

1,细胞冻存时,取上清,可使用血球计数板计数。

24min 1000rpm 离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞,根据细胞数量加入血清和DMSO,轻轻混匀,DMSO终浓度为10%,细胞密度1-2xE6/ml,每支冻存管冻存1ml细胞悬液,注意冻存管做好标识。

3,将冻存管置于程序降温盒中,放入-80度冰箱,至少2个小时以后转氮入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。



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