鸡胚成纤维细胞(UMNSAH/DF-1)
鸡胚成纤维细胞(UMNSAH/DF-1)介绍：鸡胚成纤维细胞(UMNSAH/DF-1)是起源于10 日龄的ELL-0 鸡蛋的鸡细胞株，自发永生化。分离原代鸡胚成纤维细胞并在培养液中培养；传代直到衰老；在衰老过程中离心以保持细胞培养在30%到60%满；不衰老的克隆进行鉴定并传代不少于30 次。在软琼脂上没有观察到克隆增殖，说明这些细胞是永生化而没有转化。该细胞可作为病毒增殖、重组蛋白表达和重组病毒生产的基质。
鸡胚成纤维细胞(UMNSAH/DF-1)特性：
1） 来源：鸡胚
2） 形态：成纤维细胞，贴壁生长
3） 含量：>1x106 个/mL
4） 污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5） 规格：T25 瓶或者1mL 冻存管包装
鸡胚成纤维细胞(UMNSAH/DF-1)接受后的处理：
1）收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2）请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将T25 瓶置于37℃培养约2-3h。
3）弃去T25 瓶中的培养基，添加6ml 明舟生物（mingzhoubio）附带的完全培养基。
4）如果细胞长满（90%以上）请及时进行细胞传代，传代培养用6ml 本公司附带的完全培养基。
5）接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。
鸡胚成纤维细胞(UMNSAH/DF-1)用途：仅供科研使用。
明舟生物（mingzhoubio）的鸡胚成纤维细胞(UMNSAH/DF-1)培养操作规程，供参考
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备DMEM 培养基(DMEM，GIBCO，货号11995-065)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37℃，培养箱湿度70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二．细胞处理：
1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL 培养基的15ml 离心管中混合均匀。在1000RPM 条件下离心4 分钟，弃去上清液，加入1mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml 培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS 润洗细胞1-2 次。
2. 加2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3ml 此细胞的培养基终止消化。
3. 轻轻吹打后吸出，移入15ml 离心管中，在1000RPM 条件下离心4 分钟，弃去上清液，加入1mL 培养液后吹匀。
4. 移入到事先准备好的含有5ml 培养基的T-25 培养瓶中或含有14ml 培养基的T-75 培养瓶中培养。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，先要消化处理并进行细胞计数。消化方法按照细胞传代方法的1-3 步骤进行，最后的重悬液使用血清。悬浮细胞直接计数后离心，用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO 后迅速混匀，按每1ml 的数量分配到冻存管中。明舟生物（mingzhoubio）按每个冻存管细胞数目大于1X106 个细胞冻存。
注意事项：
1. 收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。
2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
