狗肾细胞(MDCK(NBL-2))

狗肾细胞(MDCK(NBL-2))介绍：1958 年九月S.H. Madin and N.B. Darby 从一只外观正常的成年雌性英国小猎犬的肾分离等到MDCK 细胞株。角蛋白免疫过氧化物酶染色呈阳性。MDCK 被用于研究β-粥样蛋白前体的处理及其蛋白水解产物。

狗肾细胞(MDCK(NBL-2))特性：

1） 来源：狗肾

2） 形态：上皮细胞样，贴壁生长

3） 含量：>1x106 个/mL

4） 污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

5） 规格：T25 瓶或者1mL 冻存管包装

细胞接受后的处理：

1）收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。

2）请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将T25 瓶置于37℃培养约2-3h。

3）弃去T25 瓶中的培养基，添加6ml 明舟生物（mingzhoubio）附带的完全培养基。

4）如果细胞长满（90%以上）请及时进行细胞传代，传代培养用6ml 明舟生物（mingzhoubio）附带的完全培养基。

5）接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。

狗肾细胞(MDCK(NBL-2))用途：仅供科研使用。

明舟生物（mingzhoubio）的狗肾细胞(MDCK(NBL-2))培养操作规程，供参考

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备MEMα培养基(MEMα， GIBCO，货号12561-056)，90%；优质胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。

二．细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有1mL 细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL 培养基的15ml 离心管中混合均匀。在1000RPM 条件下离心4 分钟，弃去上清液，加入1mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml 培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS 润洗细胞1-2 次。

2. 加2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3ml 此细胞的培养基终止消化。

3. 轻轻吹打后吸出，移入15ml 离心管中，在1000RPM 条件下离心4 分钟，弃去上清液，加入1mL 培养液后吹匀。

4. 移入到事先准备好的含有5ml 培养基的T-25 培养瓶中或含有14ml 培养基的T-75 培养瓶中培养。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，先要消化处理并进行细胞计数。消化方法按照细胞传代方法的1-3 步骤进行，最后的重悬液使用血清。悬浮细胞直接计数后离心，用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO 后迅速混匀，按每1ml 的数量分配到冻存管中。明舟生物（mingzhoubio）按每个冻存管细胞数目大于1X106 个细胞冻存。