中国仓鼠卵巢细胞(CTLA4 Ig-24)

中国仓鼠卵巢细胞(CTLA4 Ig-24)介绍：CHO 细胞以人CTLA-4 基因细胞外结构域序列和人IgCgamma1 的绞链区，CH2 和CH#区序列的融合结构转染，构建了这株细胞。它们表达融合蛋白(CTLA4Ig)。

中国仓鼠卵巢细胞(CTLA4 Ig-24)特性：

1） 来源：中国仓鼠卵巢

2） 形态：可贴壁生长（上皮细胞样），也可悬浮生长（圆球形）

3） 含量：>1x106 个/mL

4） 污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

5） 规格：T25 瓶或者1mL 冻存管包装

运输和保存：使用含有优质胎牛血清的2ml 冻存管发送存活细胞。收到细胞后，可在1000RPM，常温条件下，离心5min 后，于洁净操作台弃去上清，加入推荐使用的培养基后转移至10cm 培养皿或者T25 培养瓶中培养，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

中国仓鼠卵巢细胞(CTLA4 Ig-24)用途：仅供科研使用。

中国仓鼠卵巢细胞(CTLA4 Ig-24)培养步骤：

一．培养基及培养冻存条件准备：

培养条件：贴壁生长时，选择DMEM-H 培养基(DMEM-H:GIBCO,货号12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L, 添加0.2 mM 脯氨酸,0.001 mM 氨甲蝶呤)，90%；优质胎牛血清，10%。

[MTX 是基因DHFR 产物的抑制物。当培养基中存在MTX 时，MTX 可渗入细胞内与DHFR 蛋白结合，使核苷酸的合成受阻。但是DHFR 基因连同其附近几千KB的DNA 还会扩增以满足核苷酸合成的需要。理论上MTX 浓度越大，DHFR 基因扩增越多，与DHFR 基因连锁的目的蛋白基因也表达得越多]

悬浮培养时，请使用悬浮生长专用培养基，培养基为：EX-CELL CD-CHO CHOSerum-free Medium,Chemically Defined(Sigma-Aldrich,货号：24361C)添加物：L-谷氨酰胺（Sigma-Aldrich,货号：G8540-25G）Anti-Clumping Agent(Gibco，货号：01-0057AE)

备注：CD-CHO CHO Serum-free Medium 请按照培养基配制说明书配制，L-谷氨酰胺配制浓度为200mM，工作浓度为8mM（即稀释25 倍，如500ml CHO Serum-freeMedium 中添加20ml 200mM L-谷氨酰胺，抗结团剂使用为1%，即500ml CHOSerum-free Medium 中添加5ml 抗结团剂）

1）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37 摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

2）冻存液：90%完全培养基（贴壁生长冻存时）或90%悬浮培养基（悬浮生长时），10%DMSO，现用现配。液氮储存。

二．细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有1mL 细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL 培养基混合均匀。在1000RPM 条件下离心4 分钟，弃去上清液，补加1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm 皿中，加入约8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS 润洗细胞1-2 次。

2. 加2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM 条件下离心4 分钟，弃去上清液，补加1-2mL 培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按1：2 到1：5 的比例分到新的含8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM 条件下离心4 分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2 到1：5 的比例分到新的含8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2 到1：3 的比例分到新的含8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml 含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO 后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM 条件下离心4 分钟，少量保存上清液（防止细胞吸走），加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO 后进行冻存。

注意事项：

1. 收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。