灌胶注意事项及问题解答

一、注意事项

1. 清洗厚薄两块玻片：初次使用需要用酒精棉球擦拭干净。经常使用用自来水冲洗干净后，再用单蒸水冲洗，晾干。也可用酒精擦拭。

2. 取合适大小，容器将各液体依次加入，在加AP和TEMED前将玻璃片放入casting frame 做成glass plate sandwich，放在水平桌面上锁定后，固定在casting stand上，注意垂直放置，压紧底面的胶条，以防漏液。

二、常见问题及解答

1. 两快玻璃板之间灌胶，胶为什么总是不平？

（1） 你的玻璃洗干净没有？应该要洗得非常干净！

（2） 过硫酸铵和TEMED的加量不合适，加量相对较多，凝胶凝固过快也会胶不平，最多按照分子克隆加倍。

（3） 加完试剂以后没有很好的摇匀，导致有些部位的聚合剂浓度过高，聚合相对较快造成胶不平。

（4） 稍微注意手法，均匀加入。

（5） 灌胶后应该用水或者正丁醇压胶面或用20%的乙醇封顶（没有毒性可以除气泡，使用效果极好）。战友小新723认为：“第一天灌胶后，用乙醇直接压，待乙醇挥发完毕后，上面加一层水，第二天电泳用，效果很好。不用正丁醇，乙醇比正丁醇效果要好多了”。

（6） 边缘胶是不容易聚合完全的，灌完胶后要立即加无水正丁醇覆盖，浓度越低的胶越不要使用双蒸水压顶，另外还可以在压顶试剂如正丁醇中添加少许AP来增加边缘胶的凝聚强度

（7） 温度也是影响胶聚合的重要因素，我们有些同学为了让胶更快的凝固而把胶放到50度的温箱，由于受热不均匀，造成胶聚合不均匀。

2. 胶为什么总是漏？

（1） 每次电泳完后，洗净玻璃、胶条和其它附件，下次用之前，用75%酒精擦拭玻璃和胶条，能有效防漏，且利于剥胶。

（2） 避免玻璃边缘（与胶条接触处）破损很重要，尤其是下面和胶条接触的地方。

（3） 关键是找一块很平的桌面，使两块玻璃底面非常齐就行了。

（4） 胶条一定要干，跑完电泳后，胶条就放在实验台上晾着。

（5） 下面的胶条注意不要老化，如果有裂纹的话用保鲜膜垫在上面，也可以有效防止漏胶，或者反过来用。

（6） 玻璃在使用过程中容易造成小的缺口，从而导致封条无法完全密封，装好架子后，在玻璃底边上抹上一层薄薄的凡士林就好了，两边多点（容易从两边漏）这样就不会漏了，就算是用了很久的很多小缺口的玻璃都没有问题，然后转移到电泳槽的时候，去掉封条，把底上的凡士林擦干就OK了（注意，一定要擦干净，尤其是少量进入了两隔玻璃之间空腔的，赢伟凡士林不导电，会影响第2相的效果的。

（7） 你可以在海绵垫下再垫一些纸，使得它与玻璃贴的更紧密。或者在玻璃底部用琼脂糖封上。

（8） 因为两块玻板没有放的完全对齐，底部不在同一个平面，所以封条封不严，重新对齐后就不漏了。以后每次只要在水平的桌面上仔细对齐两块玻板，再夹紧。用手感觉一下确定在同一平面上后，放到灌胶架并压在封条上，卡紧。注意两边均匀用力，一般不会再漏。

（9） 先把两块玻片放在夹子上，不要加紧，放到架子上，使两块玻片的底部对齐，夹紧两块玻片，然后取下再在其下面垫上垫片，这样一般就不会漏胶了。但是如果你放了垫片再对齐玻片底部，或者在桌子上对其玻片底部然后放到架子上的话，经常会漏胶

3. 条带跑得比正常的窄？

（1）可能因为胶凝的不均匀，聚合的不是很好，灌胶的时候尽量混匀。

（2）是不是有窄有宽？可能与你拔梳子的时候有关，拔梳应该迅速，冲洗加样孔的时候要小心，以免把上样带扭曲；胶配好了用枪吹几下再灌胶，还有就是要等指示剂跑到两层胶交界成一线时，再调高电压。

（3）可能是你样品的问题，如果盐浓度较高，便会挤压其它条带，致使条带宽窄不一，由于同样的原因，样品在凝胶中的速度会很慢，造成条带走的较慢，好像与你的预想不一致。

（4）常见的原因是：每孔上样量不均匀，应确保每孔中上样量一致。

（5）可能是系统的ph出了问题，有可能是你的电极缓冲液，也有可能是凝胶缓冲液，更新缓冲液看看，看是否能成功。