人慢性髓系白血病细胞阿霉素耐药株(K562/ADR)

人慢性髓系白血病细胞阿霉素耐药株(K562/ADR)特性：

1） 来源：骨髓

2） 形态：淋巴母细胞样；圆形，悬浮生长

3） 含量：>1x106 个/mL

4） 污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

5） 规格：T25 瓶或者1mL 冻存管包装

运输和保存：使用含有优质胎牛血清的2ml 冻存管发送存活细胞。收到细胞后，可在1000RPM，常温条件下，离心5min 后，于洁净操作台弃去上清，加入推荐使用的培养基后转移至10cm 培养皿或者T25 培养瓶中培养，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

人慢性髓系白血病细胞阿霉素耐药株(K562/ADR)用途：仅供科研使用。

人慢性髓系白血病细胞阿霉素耐药株(K562/ADR)培养步骤：

一．人慢性髓系白血病细胞阿霉素耐药株(K562/ADR)培养基及培养冻存条件准备：

注意：培养瓶里面的培养液是不含药物的，待细胞长到70-80%汇合度时，去掉培养液，加含500ng/ml 阿霉素药物的培养液，放入培养箱，这段时间会有少部分细胞悬浮起来，属于正常情况，通过换液可以去掉，等细胞长满就可以消化传代了，这时可以一直用含药物培养基来培养细胞，两代之后就可以将药物浓度提高到1000ng/ml，细胞冻存时不要在培养基中加药物。

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L,D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠0.11g/L)，90%；优质胎牛血清，10%，添加1000ng/ml 的阿霉素。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37 摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。

二．细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有1mL 细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL 培养基混合均匀。在1000RPM 条件下离心4 分钟，弃去上清液，补加1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm 皿中，加入约8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM 条件下离心4 分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2 到1：5 的比例分到新的含8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2 到1：3 的比例分到新的含8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM 条件下离心4 分钟，少量保存上清液（防止细胞吸走），加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。

注意事项：

1. 收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。