稀释平板菌落计数法
一、简介活性酸奶需要控制各种乳酸菌的比例，乳酸菌对营养有复杂的要求，生长需要碳水化合物、氨基酸、肽类、脂肪酸、酯类、核酸衍生物、维生素和矿物质等。测定乳酸菌时必
一、简介
活性酸奶需要控制各种乳酸菌的比例，乳酸菌对营养有复杂的要求，生长需要碳水化合物、氨基酸、肽类、脂肪酸、酯类、核酸衍生物、维生素和矿物质等。测定乳酸菌时必须尽量将试样中所有活的乳酸菌检测出来，采用稀释平板菌落计数法检测酸奶中的各种乳酸菌可获得满意的结果。本实验宗旨是了解酸乳中乳酸菌分离原理及掌握酸乳中乳酸菌菌数的检测方法。
二、操作方法
稀释平板菌落计数法
三、原理
活性酸奶需要控制各种乳酸菌的比例，有些国家将乳酸菌的活菌数含量作为区分产品品种和质量的依据。由于乳酸菌对营养有复杂的要求，生长需要碳水化合物、氨基酸、肽类、脂肪酸、酯类、核酸衍生物、维生素和矿物质等，一般的肉汤培养基难以满足其要求。测定乳酸菌时必须尽量将试样中所有活的乳酸菌检测出来。要提高检出率，关键是选用特定良好的培养基。采用稀释平板菌落计数法，检测酸奶中的各种乳酸菌可获得满意的结果。
材料与仪器
酸奶 MRS培养基 改良CHALMERS培养基 M17培养基
水
移液管 带玻璃珠三角瓶 试管 培养皿 旋涡均匀器 恒温培养箱
水
移液管 带玻璃珠三角瓶 试管 培养皿 旋涡均匀器 恒温培养箱
步骤
一、样品稀释
先将酸奶样品搅拌均匀，用无菌移液管吸取样品25 ml加入盛有225 ml无菌水的三角瓶中，在旋涡均匀器上充分振摇，务必使样品均匀分散，即为10：1的样品稀释液，然后根据对样品含菌量的估计，将样品稀释至适当的稀释度。
二、制平板
选用2~3个适合的稀释度，培养皿贴上相应的标签，分别吸取不同稀释度的稀释液1 ml置于平皿内，每个稀释度作2个重复。然后用溶化冷却至46 ℃左右的MRS或改良CHALMERS培养基倒平皿，迅速转动平皿使之混合均匀，冷却成平板。
三、培养和计数
将平皿倒置于40 ℃恒温箱内培养24~48 h，观察长出的细小菌落，计菌落数目，按常规方法选择30~300个菌落平皿进行计算。
注意事项
1. 指示剂显色
由于产酸菌落周围能使CaCO3产生溶解圈，酸碱指示剂应呈酸性显色反应。
2. 镜检形态
必要时，可挑取不同形态菌落制片镜检确定是乳杆菌或乳链球菌。保加利亚乳杆菌呈杆状，成单杆、或双杆菌或长丝状。嗜热链球菌，呈球状，成对、或短链、或长链状。
3. 参照比较
据介绍，改良CHALMERS培养基的检出率较MRS培养基高，M17培养基较适合于乳球菌的培养，在检测时可同时使用多个培养基作比较。
由于产酸菌落周围能使CaCO3产生溶解圈，酸碱指示剂应呈酸性显色反应。
2. 镜检形态
必要时，可挑取不同形态菌落制片镜检确定是乳杆菌或乳链球菌。保加利亚乳杆菌呈杆状，成单杆、或双杆菌或长丝状。嗜热链球菌，呈球状，成对、或短链、或长链状。
3. 参照比较
据介绍，改良CHALMERS培养基的检出率较MRS培养基高，M17培养基较适合于乳球菌的培养，在检测时可同时使用多个培养基作比较。
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