人类免疫缺陷病毒分离和鉴定
简介HIV-1 分离培养的意义：HIV 抗体不确定或 HIV-1 阳性母亲所生婴儿的鉴别诊断；HIV 表型耐药检测及其他 HIV 生物学特征研究；HIV 感染的
简介
HIV-1 分离培养的意义：HIV 抗体不确定或 HIV-1 阳性母亲所生婴儿的鉴别诊断；HIV 表型耐药检测及其他 HIV 生物学特征研究；HIV 感染的辅助诊断 HIV 感染窗口期。细胞培养与血清学方法相比，专一性很强，不会出现假阳性。但其敏感性不如血清学和分子生物学，因为必须有一定数量的感染细胞存在才能培养出病毒来。细胞培养方法的最大好处是能得到最原始的临床毒株，其重要意义在于确认对 WB 不确定的疑似感染者及母婴传播、婴幼儿 HIV 感染者。毒株可供药物筛选、耐药性及其生物学特性等研究。
原理
人类免疫缺陷病毒分离和鉴定的基本原理是细胞培养与血清学方法相比，专一性很强，不会出现假阳性。但其敏感性不如血清学和分子生物学，因为必须有一定数量的感染细胞存在才能培养出病毒来。
材料与仪器
器材：HIV阴性者外周血淋巴细胞（PBMC）、传代淋巴细胞系。
步骤
人类免疫缺陷病毒分离和鉴定的基本过程可分为如下几步：
A 一般采用 HIV 阴性者外周血淋巴细胞（PBMC）与受检者标本（PBMC、全血、血浆、精液及其他体液）共培养的方法，最常用的方法是 PBMC 共培养，适当周期培养后测定培养液 HIV p24 抗原或反转录酶（RT），进而判断患者的淋巴细胞是否受到 HIV 感染。
B 也可用传代淋巴细胞系如 HT-H9、Molt-4、CEM 细胞来做分离及传代。培养 2~4 周后，如出现不同程度细胞病变效应（CPE），则说明有病毒增殖，特征性的细胞病变是有融合的多核巨细胞。
C 无论是否出现 CPE，都需要再用免疫学方法检测 HIV p24 抗原，或用生化方法测定培养液中反转录酶的活性，也可用电镜检测 HIV 颗粒进行鉴定，确定患者标本中是否有 HIV。
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