多项微量简易鉴测技术实验

API 20E 系统是 API/ATB 中最早和最重要的产品，也是国际上应用最多的系统，本实验用它检验细菌。该系统的鉴定卡是一块有 20 个分隔室的塑料条，分隔室由相连通的小管和小环组成，各小管中含不同的脱水培养基、试剂，或底物等，每一分隔室可进行一种生化反应，个别的分隔室可进行两种反应，主要用来鉴定肠杆菌科细菌，如图 1 所示。

图 1　API 20E 鉴定卡

待检验的肠杆菌科的分纯的菌株
无菌水
API 20E 系统 液体石蜡 灭菌毛细滴管

1. 将待检验的单个或多个菌落用无菌水配制成 1.5 亿或大于 1.5 亿的菌惫液，混合均匀。

2. 将 API 20E 鉴定卡的密封膜拆除，在卡上标明检验菌号、日期和试检者。

3. 用无菌毛细管吸配制好的菌液，沿分隔室的小管内壁稍微倾斜地缓缓加入小管中，装满各个小管，而对鉴定卡上的试验名称加有方框线条的小杯，则还要加满菌液，对试验名称下有一条横线的小杯则要加满液体石蜡。

加液时避免形成气泡，如果形成了气泡，则轻轻摇动除去，切勿用吸有菌液的毛细管除去气泡。4. 将接种的鉴定卡放入装有少量水的塑料盒或浅瓷盘中（防反应液蒸发），置 37℃ 孵育。

5. 孵育 18～24 h 后，在需要添加试剂的小杯中加入指定的试剂，如 IND 反应加入 IND 试剂，V.P. 反应加入 V.P. 试剂。观察鉴定卡上各项反应的变色情况，根据反应判定表（表1）判定各项反应是阳性或阴性反应。

6. 按鉴定卡上反应项目的顺序，每三个反应项目编为一组，共编为七组，每组中每个反应项目定为一个数值，依次是 1、2、4，各组中反应阳性者记「+」，则写下其所定的数值，反应阴性者记「—」，则写为 0，每组中的数值相加，便是该组的编码数，这样便形成了 7 位数字的编码，见表 2 举例说明。

7. 用 7 位数字的编码査检索表，或输入电脑检索。则能将检验的细菌鉴定是什么菌种。