细菌的裂解气相色谱鉴定实验

气相色谱技术（gas chromatography，即 GC）是色谱技术的一种，其试验仪器气相色谱仪主要由载气系统、进样系统、色谱柱、检测器和记录仪或数据处理装置等组成，如图 1。

图 １　气相色谱仪示意图

该技术的基本原理是试验样品中的各组分。随流动相（气体）经过装在色谱柱中的固定相而流动，吸附力或溶解性弱的组分很难被吸附或溶解在固定相中，流动快，首先流出色谱柱，而吸附力或溶解性强的组分则后流出色谱柱，因此样品中各组分便能分离开，被分离开的组分依次使检测器能检测到，记录仪在记录纸上则依次记录被分离开的组分，每一组分呈一色谱峰，或同时由数据处理装置直接计算和打印出试验结果。根据注入样品开始到出现色谱峰最高点为止的时间（称为保留时间 tR）、色谱峰的高度 h 和色谱峰宽度 W 等试验数据，或其他补充试验的数据，可以对样品中各组分定性和定量。气相色谱技术分离样品组分的原理见示意图 2。

图 ２　气相色谱分离样品组分的原理示意图

二株革兰氏阴性细菌 二株革兰氏阳性球菌 二株芽孢杆菌
无菌水 生理盐水
气相色谱仪 进样系统的配件裂解炉 氢离子火焰检测器 不锈钢色谱柱 离心机

1. 将菌株分别接种在琼脂营养斜面上，37℃ 培养 24 h，用接种环取下菌苔，切勿带有培养基，将菌苔放入盛有生理盐水的塑料小离心管中，1000 r/min 离心 5min，再用无菌水洗涤菌体三次，洗涤时的离心速度、时间都同前，只是最后一次离心10 min，弃去洗涤液，然后在电吹风气流下脱水 15 min，制成待鉴定的细菌样品。

2. 选择裂解色谱条件为：裂解温度 800℃，裂解时间 10 s，进样口温度 260℃，检测器温度 280 ℃，拄起始恒温 80℃ 恒温 4 min 后，6 ℃/min，氢气 45 ml/min，空气 450 ml/min，记录仪纸速 8 mm/min。

3. 待调试色谱仪运转正常后，取待鉴定的细菌样品 1.5 mg，置于裂解头铂舟内，然后插入裂解炉内，停留裂解 10 s，按上述选择的裂解条件进行试验，每个样品在色谱仪中分离时间为 25min。

每个样品的色谱鉴定，必须严格保持裂解色谱条件一致。

4. 从记录仪上取下记录有样品各个色谱峰的记录纸，或从数据处理机上取下记录有直接计算出的样品各个色谱峰分析结果的记录纸。