显微镜直接计数法（ 牛乳中细菌的检查实验）
简介
从健康母牛体内刚挤出的牛奶，含有少量的正常起始微生物。但将牛奶装入未消毒的器具和在分装、运输过程中，会被很多其他微生物甚至致病菌污染，而且牛乳含有丰富的营养物质（糖类、蛋白质、脂肪、无机盐和维生素等）， 在其中的微生物会很快繁殖，因此，一份牛乳样品的细菌含量可反映母牛的健康状况和牛乳生产与保藏的条件。
牛乳的细菌学检査方法有下列三种：1. 显微镜直接计数法——涂片面积与视野面积之比估算法；2. 美蓝还原酶试验法；3. 标准平板计数法。
来源：《微生物学实验（第三版）》
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操作方法
显微镜直接计数法
材料与仪器
生牛乳 10 ml
10 ul 微量吸液器与吸嘴 载玻片 美蓝染液（Levowitz－Weber 染料）缶 显微镜 水浴锅 试管架 吸水纸
步骤
1. 在白纸上画出 1 cm2 的方块，然后将玻片放在纸上。
2. 用 10 ul 的微量吸液器吸取混匀了的生牛乳样品，放在玻片 1 cm2 区域的中央。
3. 用接种针将牛乳涂匀，并涂满 1 cm2 的范围。
4. 使涂片于空气中慢慢干燥。将铁丝试管架放在沸水浴中，然后置已干燥的涂片于试管架上，用蒸汽热固定 5 min，待干。
5. 浸于美蓝染液缶内染色 2 min。
6. 取出玻片，用吸水纸吸去多余的染料，晾干。
7. 再用水缓缓冲洗，晾干。
8. 油镜下观察细菌数，共数 30～50 个视野。
9. 计算
每毫升的细菌总数＝平均每视野的细菌数×500 000
因为：
一般油镜的视野直径为 0.16 mm
一个视野的面积＝0.082 × 3.1416＝0.02 mm2 ，化成 cm2 ，视野面积＝0.02 × 0.01＝0.0002 cm2 ，1 cm2 的视野数＝1.0 ÷ 0.0002＝5000
又因每 1 cm2 的牛乳量为 0.01 ml，即 1/100 ml，
则每一视野的牛乳量＝1/100×1/5 000＝1/500 000 ml
所以，一个视野中的 1 个细菌就代表 1 ml 牛乳中有 500 000 个细菌。因此 1 ml 牛乳中的细菌数＝一个视野的细菌数×500 000＝ 50 个视野的细菌数 ÷ 50×500 000
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