血球计数板细胞计数法

细胞计数法是用来计数细胞悬液中细胞数量的一种方法。一般利用计数板（血球计数板）进行。即可用于分离（散）细胞培养接种前计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，也可用于对培养物的细胞数量进行计数。不论计数的对象如何，均须制备分散的细胞悬液。

器材：

盖玻片、玻璃虹吸管、显微镜

试剂：

细胞悬液、PBS、0.25% 胰蛋白酶溶液、培养液

1. 制备细胞悬液

对于悬液培养的细胞，可直接进行下面的步骤 2（计数与计算过程）。如果计数对象为贴壁生长的细胞，首先需将培养物按如下步骤制备成细胞悬液。

（1） 终止培养，将培养液吸出，用 PBS 洗培养物一次；

（2） 给培养瓶内加入 1 mL 0.25% 胰蛋白酶溶液，于 37 ℃ 消化 3~5 min。期间不断在镜下观察。当细胞变圆接近脱壁时，弃消化液；

（3） 加入一定量的培养液（如果这些培养细胞不再有用，可加 PBS），用吸管吹打，使细胞脱壁而制成细胞悬液。

2. 计数与计算过程

（1） 在细胞计数板中央放置计数专用的盖玻片；

（2） 用玻璃虹吸管吸取细胞，让虹吸管在盖玻片上或下侧的计数板凹槽处流出悬液，至盖玻片被液体充满为止；

（3） 置显微镜下计数四角大方格内的细胞总数。对于压线的细胞只计数在上线和左线者，对于细胞团按单个细胞计数；

（4） 按下式计数细胞悬液的密度：细胞密度 ＝（4 个大格细胞总数 / 4）× 104 个/mL。

三、显微镜下血球计数板如下图：