酵母菌RNA制备实验
一、简介原理酵母核酸中RNA含量较多，DNA含量则少于2%。RNA可溶于碱性溶液，当碱被中和后，可加乙醇使其沉淀，有此可得粗RNA制品。 二、操作方法备选方案1
一、简介
原理酵母核酸中RNA含量较多，DNA含量则少于2%。RNA可溶于碱性溶液，当碱被中和后，可加乙醇使其沉淀，有此可得粗RNA制品。
二、操作方法
备选方案1（玻璃珠法）
三、材料与仪器
酵母菌
酚 氯仿 异戊醇
玻璃珠 试管 摇床 培养箱 离心机
酚 氯仿 异戊醇
玻璃珠 试管 摇床 培养箱 离心机
步骤
1. 培养并收集酵母菌细胞，冷冻细胞沉淀。
2. 用300 μl RNA缓冲液中重悬细胞沉淀。
2. 用300 μl RNA缓冲液中重悬细胞沉淀。
3. 加1体积冷的酸洗玻璃珠（体积与约200 μl 水相等）、300 μl 的用RNA缓冲液平衡的25：24 ：1酚/氯仿/异戊醇，拧紧瓶盖，然后颠倒并上下振荡以保证珠子悬浮，在旋涡混合器上高速剧烈振荡2 min。
4. 室温下离心1 min，将200~250 μl 水（上）相转移到一个干净的离心管中。
5. 加等体积的25：24：1酚/氯仿/异戊醇，激烈振荡10 s。
4. 室温下离心1 min，将200~250 μl 水（上）相转移到一个干净的离心管中。
5. 加等体积的25：24：1酚/氯仿/异戊醇，激烈振荡10 s。
6. 重复步骤4，加3体积冰冷的无水乙醇，充分混合，于-20℃放置30 min 以上，或在干冰上放置5 min。
7. 于4℃离心2 min，吸出或倒掉上清，用冰冷的70%乙醇洗涤沉淀。
8. 于4℃离心1 min，吸出或倒掉上清，干燥沉淀。沉淀用50 μl 水重悬，用分光光度法测定A260及A280以确定浓度，于-70℃贮存RNA。
7. 于4℃离心2 min，吸出或倒掉上清，用冰冷的70%乙醇洗涤沉淀。
8. 于4℃离心1 min，吸出或倒掉上清，干燥沉淀。沉淀用50 μl 水重悬，用分光光度法测定A260及A280以确定浓度，于-70℃贮存RNA。
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