扦片法
一、简介
放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体的—类革兰氏阳性细菌。常见放线菌大多能形成菌丝体，紧贴培养基表面或深入培养基内生长的叫基内菌丝（简称“基丝”），基丝生长到一定阶段还能向空气中生长出气生菌丝（简称“气丝”）并进一步分化产生孢子丝及孢子，有的放线菌只产生基丝而无气丝。在显微镜下直接观察时，气丝在上层、基丝在下层，气丝色暗，基丝较透明。孢子丝依种类的不同，有直、波曲、各种螺旋形或轮生。在油镜下观察，放线菌的孢子有球形、椭圆、杆状或柱状。能否产生菌丝体及由菌丝体分化产生的各种形态特征是放线菌分类鉴定的重要依据为了观察放线菌的形态特征，人们设计了各种培养和观察方法，这些方法的主要目的是为了尽可能保持放线菌自然生长状态下的形态特征，本实验介绍其中几种常用方法。
二、操作方法
扦片法
三、原理
将放线菌接种在琼脂平板上，扦上灭菌盖玻片后培养，使放线菌菌丝沿着培养基表面与盖玻片的交接处生长而附着在盖玻片上匾观察时，轻轻取出盖玻片。置于载玻片上直接镜检。这种方法可观察到放线菌自然生长状态下的特征，而且便于观察不同生长期的形态。
四、材料与仪器
灭菌的高氏1号琼脂 平皿 盖玻片 载玻片 接种环 镊子 显微镜
五、步骤
1. 倒平板
取融化并冷至大约 50 ℃ 的高氏 1 号琼脂约 20 ml 倒平板，凝固待用。
2. 接种
用接种环挑取菌种斜面培养物（孢子）在琼脂平板上划线接种。划线要密些，以利扦片。
3. 扦片
以无菌操作用镊子将灭菌的盖玻片以大约 45° 角扦入琼脂内（扦在接种线上）（图 IV-7），扦片数量可根据需要而定。
4. 培养
将扦片平板倒置， 28 ℃ 培养，培养时间根据观察的目的而定，通常 3～5 d。
5. 镜检
用镊子小心拔出盖玻片，擦去背面培养物，然后将有菌的一面朝上放在载玻片上，直接镜检。
六、注意事项
观察时宜用略暗光线：先用低倍镜找到适当视野。再换高倍镜观察。如果用 0.1% 美蓝对培养后的盖玻片进行染色后观察，效果会更好。
七、常见问题
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