玻璃纸法
一、简介
放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体的—类革兰氏阳性细菌。常见放线菌大多能形成菌丝体，紧贴培养基表面或深入培养基内生长的叫基内菌丝（简称“基丝”），基丝生长到一定阶段还能向空气中生长出气生菌丝（简称“气丝”）并进一步分化产生孢子丝及孢子，有的放线菌只产生基丝而无气丝。在显微镜下直接观察时，气丝在上层、基丝在下层，气丝色暗，基丝较透明。孢子丝依种类的不同，有直、波曲、各种螺旋形或轮生。在油镜下观察，放线菌的孢子有球形、椭圆、杆状或柱状。能否产生菌丝体及由菌丝体分化产生的各种形态特征是放线菌分类鉴定的重要依据为了观察放线菌的形态特征，人们设计了各种培养和观察方法，这些方法的主要目的是为了尽可能保持放线菌自然生长状态下的形态特征，本实验介绍其中几种常用方法。
二、操作方法
玻璃纸法
三、原理
玻璃纸是一种透明的半透膜，将灭菌的玻璃纸覆盖在琼脂平板表面。然后将放线菌接种于玻璃纸上，经培养，放线菌在玻璃纸上生长形成菌苔。观察时，揭下玻璃纸，固定在载玻片上直接镜检。这种方法既能保持放线菌的自然生长状态，也便于观察不同生长期的形态特征。
四、材料与仪器
灭菌的高氏1号琼脂 平皿 玻璃纸 盖玻片 玻璃涂棒（选用） 接种环 载玻片 镊子 显微镜
五、步骤
1. 倒平板
取融化并冷至大约 50℃ 的高氏 1 号琼脂约 20 ml 倒平板，凝固待用。
2. 铺玻璃纸
以无菌操作用镊子将已灭菌（155～160℃ 干热灭菌 2 h）的玻璃纸片（似盖玻片大小）铺在培养基琼脂表面。用无菌玻璃涂棒（或接种环）将玻璃纸压平，使其紧贴在琼脂表面玻璃纸和琼脂之间不留气泡。每个平板可铺 5～10 块玻璃纸。也可用略小于平皿的大张玻璃纸代替小纸片书但观察时需要再剪成小块。
3. 接种
用接种环挑取菌种斜面培养物（孢子）在玻璃纸上划线接种。
4. 培养
将平板倒置， 28℃ 培养 3～5d。
5. 镜检
在洁净载玻片上加一小滴水，用镊子小心取下玻璃纸片。菌面朝上放在玻片的水滴上，使玻璃纸平贴在玻片上（中间勿留气泡）令先用低倍镜观察，找到适当视野后换高倍镜观察。
六、注意事项
操作过程，勿碰动玻璃纸菌面上的培养物。
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