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微生物学

胶体金标记免疫电镜技术

2024-04-20 微生物学 加入收藏
一、简介病毒是极微小的生物体,用电镜观察时,由于其变形、损伤或杂质的存在,以及标本中病毒的数量有限,只靠其形态特点较难确切辨认。为了提高辨认的准确性,可应用特异

一、简介

病毒是极微小的生物体,用电镜观察时,由于其变形、损伤或杂质的存在,以及标本中病毒的数量有限,只靠其形态特点较难确切辨认。为了提高辨认的准确性,可应用特异性抗体,使其与病毒结合,在电镜下可清晰地辨认特异性抗体及其结合的病毒。这种将免疫学检测方法应用于电镜检查的技术就是免疫电镜技术 (Immunoelectromicroscope, IEM) 。


目前免疫电镜主要分为有标记物和无标记物两大类。无标记物类常用方法为抗原抗体直接作用后形成的免疫复合物的电镜观察。有标记物类,常用在电镜下可见的标记物标记抗体(或抗原),使标记抗体(或抗原)具有原标记物和抗体(或抗原)的特性,然后用标记抗体(或抗原)与相应的组织或培养细胞内特异抗体(或抗原)作用,形成不溶性免疫复合物,即在电镜下可见的标记物,以间接证实免疫反应的发生。常用的标记物有:铁蛋白、辣根过氧化物酶、胶体金等。

二、操作方法

胶体金标记免疫电镜技术

三、原理

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四、材料与仪器

病毒
胶体金
电子显微镜

五、步骤

免疫胶体金标记技术又称免疫金染色技术 (immunogold staining technique), 是 Faulk 和Taylor 于 1971 年发现直径为 5~50nm 的胶体金 (colloidal gold) 在电镜下具有很高的电子密度,比铁蛋白颗粒还易辨认,故可用作免疫透射电镜的示踪物。后来研究发现,当胶体金的直径为 0. 8nm 或 1. 0nm 时,其穿透组织、细胞的能力增强而不影响观察结果。超小粒胶体金经银增强系统处理后,观察分辨效果更佳。胶体金对电镜检查的包埋标本和冷冻超薄切片的非特异性吸附都较低,因此,已被广泛地应用于各种电镜检查。


六、注意事项

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