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微生物学

细胞免疫酶染色法(以检测血清中 EB 病毒 IgA 抗体为例说明)

2024-04-20 微生物学 加入收藏
一、简介免疫酶染色试验一般都由两部分组成,即一次或数次抗原和抗体的免疫学反应和一次酶促反应。第一步抗原抗体结合中,酶结合物起抗体作用,在第二步加入底物后,酶起到

一、简介

免疫酶染色试验一般都由两部分组成,即一次或数次抗原和抗体的免疫学反应和一次酶促反应。第一步抗原抗体结合中,酶结合物起抗体作用,在第二步加入底物后,酶起到了催化的生物放大作用。该方法具有敏感性高,标本可长期保存,使用一般光学显微镜就能观察等优点,但有时也存在非特异性染色的问题。






二、操作方法

细胞免疫酶染色法(以检测血清中 EB 病毒 IgA 抗体为例说明)

三、原理


免疫酶染色试验 (immunoenzymatic staining test, IEST) 是用酶(如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等)标记已知抗体或抗原,与相应抗原或抗体结合,形成酶标记抗体-抗原复合物,复合物中的酶在遇到相应的底物时,能催化底物产生颜色反应,根据有色产物的有无及其浓度,即可间接推测被检抗原或抗体是否存在及其含量,从而达到定性或定量的目的。

四、材料与仪器

EB 病毒细胞抗原片
辣根过氧化物酶 (HRP) 标记的马抗人 IgA抗体
玻片

五、步骤

(1) 首先将保存的 EB 病毒细胞抗原片,移于室温,吹干。


(2) 每孔内滴加 0.01mol/L PBS(pH 7. 4) 稀释的待检血清(每个标本加 1 孔),同时分别加1 :10 稀释的 EB 病毒 VCA IgA 抗体阳性和阴性血清各 2孔做为对照,移入湿盒中置 37℃温育30 min 后,用 PBS 液洗 3次,每次 5 min 。


(3) 每孔内滴入用 PBS 液作适当稀释的 HRP 标记的马抗人IgA 抗体,放入湿盒后,置 37℃温育 30min, 再用 PBS 液洗 3 次,每次 5min 。


(4) 将细胞片浸入酶底物内约 4 min, 在反应结束后,用蒸馏水漂洗 1 次,吹干并镜检。


3. 结果判断 在普通光学显微镜下阳性细胞为棕褐色,阴性细胞白色透明不显色。

六、注意事项

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七、常见问题

IgA抗体:使用时用 0. 01 mol/L pH 7. 4 PBS 作适当稀释 ,酶底物溶液:称取 3 3'-二氨基联苯胺 50 mg 溶于 0. 05 mol/L Tris-HCl 缓冲液 (pH 7.6)100 ml 加 3%H2O2 0.1ml



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