卵黄囊接种

卵黄囊接种主要用于虫媒病毒、衣原体及立克次体等的分离和繁殖。这些大的病原体主要在卵黄囊的内皮细胞中生长，且生长速度很快，立克次体在染色后也可看到。

鸡胚接种技术的原理是用病毒（如牛痘病毒（vaccinia virus）和鸡新城疫病毒（Newcastle-disease virus））接种鸡胚。 牛痘病毒适宜于在绒毛尿囊膜上生长，经培养后，产生肉眼可见的白色痘疱样病变，似小结节或白色小片云翳状。 鸡新城疫病毒适宜接种在尿囊腔和羊膜腔内，生长后，鸡胚全身皮肤出现出血点，以脑后最显著。 鸡胚培养法是用来培养某些对鸡胚敏感的 动物病毒 的一种培养方法，此方法可用以进行多种病毒的分离、培养，毒力的滴定，中和试验以及抗原和疫苗的制备等。

器材：

①孵卵箱

②检卵灯、照明灯、卵杯、卵盘、鸡胚开孔器

③注射器

④眼科用剪刀和摄子、酒精灯和毛细吸管

试剂：

①材料：受精鸡卵最好选择健康来亨鸡受精卵，因为来亨鸡的卵壳洁白易于照视观察，如无此卵也可选择其他受精鸡卵。用于病毒培养的受精鸡胚，最好是来自无特定病原体鸡群 。

②消毒剂（2.5％ 碘酒和 75% 酒精）

③2％ 来苏儿液

卵黄囊接种的基本过程可分为如下几步：

(1) 接种步骤与方法

1) 取 5~8 日龄鸡胚（此时期卵黄囊大，易接种，且有较大的表面积供病原体繁殖），于检卵灯上画出气室和胚胎位置，垂直放置在卵架上，钝端朝上，并用 2.5％ 碘酒酒和 75％ 酒精消毒气室端。

2) 用开孔器在气室中央的卵壳上钻一小孔，勿损伤壳膜，用带有 6 号针头的 1 ml 注射器将样品从小孔处沿胚的纵轴迅速刺入约 3 cm，注入 0.2~0.5 mL 待接种的病毒于卵黄囊内，随后用胶带或熔化的石蜡封孔。

3) 置孵化箱内继续孵育 3~8 天，时间长短应根据病毒或立克次体的种类而定，每天翻卵 2 次，弃掉 24 小时内死亡的鸡胚（但东方型和西方型马脑炎病毒可能在接种后 15~24 小时内引起鸡胚死亡）。

(2) 解剖与收获

1) 收获时，鸡卵预冷，用 2.5％ 碘酒和 75％ 酒精消毒气室端的卵壳，用剪子去掉气室上的卵壳，除去壳膜后，用摄子将卵黄囊与绒毛尿囊膜分开。

2) 取一把灭菌摄子夹出卵黄囊（黄色容易辨认）放在灭菌平皿中，必要时用生理盐水冲去卵黄。也可将全部内容物倾入平皿中，然后剥出卵黄囊。

3) 将不带卵黄的膜放在无菌平皿或烧杯中，以便用于染色检查或进行传代。对某些病毒的分离则要收集全部胚体。

1. 防止污染 为了减少污染，整个过程均需无菌操作，否则鸡胚一经污染，即迅速死亡或影响病毒的培养 。

2. 适宜的培养温度 接种过的鸡胚，应根据实验病原繁殖所需温度，放入 33~37 °C 温箱内培养 。