热激法
一、简介质粒的转化是指将质粒或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程。将连接产物转化到感受态细胞中，实现重组克隆的增殖，便于后续分子操作（1）用于基因的克隆增殖；
一、简介
质粒的转化是指将质粒或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程。将连接产物转化到感受态细胞中，实现重组克隆的增殖，便于后续分子操作（1）用于基因的克隆增殖；（2）筛选目的细胞。
二、操作方法
热激法
三、原理
热激法：大肠杆菌在0 ℃ CaCl2低渗溶液中，菌细胞膨胀成球形，转化混合物中的DNA形成抗DNase的羟基－钙磷酸复合物粘附于细胞表面，经42 ℃短时间热冲击处理，促进细胞吸收DNA复合物，在丰富培养基上生长数小时后，球状细胞复原并分裂增殖。在被转化的细胞中，重组子基因得到表达，在选择性培养基平板上可挑选所需的转化子。
材料与仪器
外源片段与载体的连接产物 大肠杆菌 感受态细胞
X-gal Amp LA培养基 水 抗生素
培养皿 灭菌锅 离心管 摇床
X-gal Amp LA培养基 水 抗生素
培养皿 灭菌锅 离心管 摇床
步骤
1. l ml X-gal (20 mg/ml)，25 ml Amp（100 mg/ml），250 ml制备选择性培养基平板：在融化的250 ml LA培养基中250 mI PTG (200 mg/ml)，混匀后倒入灭菌培养皿中；
2. 取出3管制备好的感受态细胞，放在冰上融化；
3. 每100 ul感受态细胞加入约20 ng质粒DNA，3管分别加连接产物、标准超螺旋质粒DNA（阳性对照）及不加入任何DNA（阴性对照），用移液器轻轻吸打均匀，在冰上放置30分钟；
4. 热击：将离心管放置42 ℃水浴，热击90秒，注意：勿摇动离心管；
5. 冰镇：快速将离心管转移至冰浴，放置1－2分钟；
6. SOC培养基，在37 ℃摇床温和摇动温育45分钟，使细菌复苏；复苏：每管加400 ul
7. 布皿：取适当体积均匀涂布于含有IPTG、X-gal、抗生素（Amp）的LA平板；
8. 培养：倒置培养皿，于37 ℃培养12－16小时 即可观察到蓝白相间的菌落（其中白色菌落为含有外源插入片段的转化子，蓝色菌落是载体自连的转化子）
2. 取出3管制备好的感受态细胞，放在冰上融化；
3. 每100 ul感受态细胞加入约20 ng质粒DNA，3管分别加连接产物、标准超螺旋质粒DNA（阳性对照）及不加入任何DNA（阴性对照），用移液器轻轻吸打均匀，在冰上放置30分钟；
4. 热击：将离心管放置42 ℃水浴，热击90秒，注意：勿摇动离心管；
5. 冰镇：快速将离心管转移至冰浴，放置1－2分钟；
6. SOC培养基，在37 ℃摇床温和摇动温育45分钟，使细菌复苏；复苏：每管加400 ul
7. 布皿：取适当体积均匀涂布于含有IPTG、X-gal、抗生素（Amp）的LA平板；
8. 培养：倒置培养皿，于37 ℃培养12－16小时 即可观察到蓝白相间的菌落（其中白色菌落为含有外源插入片段的转化子，蓝色菌落是载体自连的转化子）
注意事项
1、利用氨苄青霉素抗性筛选转化子时，用转化细胞铺平板的密度要低（90mm平板上不得超过105个菌落），同时37℃培养不应超过20小时，具氨苄青霉素抗性的转化体可将－内酰胺酶分泌到培养基中，迅速灭活菌落周围的抗生素，从而导致对氨苄青霉素敏感的卫星菌落的出现。
2、 鉴定转化子中是否含有外源DNA片段常用的方法有：
1) 互补；
2) 杂交筛选；
3) 插入失活（一些老质粒如pBR322等）;
4) 小量提取质粒酶切检测、PCR检测
常见问题
转化后，可以根据质粒上带有的某种特殊基因的表达来鉴定菌落，最常用的有：抗药性基因的表达，比如质粒带有氨苄抗性基因，能在AMP平板上长的一般可以初步判断为转化成功的菌；还有就是显色筛选，比如质粒上的LacZ基因表达，间接促使添加了X-gal的培养基变蓝，绿色荧光蛋白基因表达后菌落发荧光等。
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