微生物学

在液体培养基中形成孢子

2024-04-23 微生物学加入收藏

一、简介一种新的酵母菌株的构建方案分为几个不同的步骤：①二倍体的构建，在这里两个单倍体进行交配；②孢子形成，在这里二倍体细胞被诱导形成孢子；③四分体孢子的制备，

一、简介

一种新的酵母菌株的构建方案分为几个不同的步骤：①二倍体的构建，在这里两个单倍体进行交配；②孢子形成，在这里二倍体细胞被诱导形成孢子；③四分体孢子的制备，在这里囊壁被从四分体孢子上除去；④四分体孢子的分离，在这里来自一个单独的四分体抱子的四个单倍体抱子中的每一个都被明确地安置在一块平板上，并继续生长用作以后的研究。

二、操作方法

在液体培养基中形成孢子

三、原理

四、材料与仪器

培养基

五、步骤

1）在合适的培养容器中，加入YPD培养基培养，待形成孢子的二倍体细胞生长至 OD600为 2.5〜3.0 (约为 8×107 细胞/mL)。

2)转移1 mL培养液至一支无菌15 mL聚丙烯试管中，1200 g离心5 min。

3)倒去上清，用5 mL无菌水重悬细胞，涡旋振荡使细胞充分悬浮，再按步骤2离心。

4)倒去上清，细胞用1 mL添加了特定二倍体细胞所需营养成分的孢子形成液体培养基悬浮。

5）于30℃,350 r/min以上转速培养2〜3天，在显微镜下检査孢子的形成。

如果酵母菌株难以诱导形成孢子，用YPA培养基预培养细胞。用乙酸作碳源时，酵母菌需要呼吸，而呼吸作用是孢子形成所必需的。