酵母菌二倍体细胞的孢子形成实验

一、在平板上形成孢子

1. 挑或选择性平板上的酵母菌单菌落接种在孢子形成平板上。

如果无需选择的活，细胞在转移到孢子形成平板之前，可以在YPD平板上先培养几天。单个菌落在YPD平板上生长3~4天，而对小块细胞来说，可在平板上生长2天，这种预生长并非必需的，但它可以使孢子形成的效率更高些，在转移酵母细胞时，应用少量细胞在孢子形成平板上涂布相对较大的面积，不应见到成团的接种物。

2. 于25℃培养4天。

1. 在合适的培养容器中，加入YPD培养基培养，待孢子形成的二倍体细胞生长至OD600为2.5~3.0。

2. 转移1 ml 培养液至一支一次性使用的无菌15 ml 聚丙烯试管中，12 000 g 离心5 min。

3. 倒去上清，用5 ml 水重悬细胞，在按步骤2离心。

4. 倒去上清，细胞用1 ml 添加了特定二倍体细胞所需营养成分的孢子形成液体培养基重悬。

5. 于30℃，350 r/min 以上转速培养2~3天，在显微镜下检查孢子的形成。