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用噬菌粒载体制备单链DNA
原理噬菌粒巧妙地组合了质粒和丝状噬菌体的特征。除了基本特征外,这些质粒通常是高拷贝数的,并带有一个修饰后的丝状噬菌体的主要基因间区。这个区域 ( 野生型为 50
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应用黏粒载体构建基因组DNA文库
原理在 λ 噬菌体中构建基因组 DNA 文库的步骤与在黏粒载体中的步骤基本一致。在这两种系统中,真核 DNA 在体外与载体 DNA 连接,形成能包装到 λ 噬菌
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高容量载体中基因组DNA片段末端的分离(小载体PCR)
原理许多真核生物的基因所包含的 DNA,远非单个重组子所能容纳得了的。对于大多数染色体来说,更是如此。因此,必须构建一套重叠的 DNA 克隆,这些克隆的 DNA
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低熔点琼脂糖凝胶中DNA的回收(有机溶剂抽提)
原理羟乙基修饰的琼脂糖可降低链间的氢键数目,并可在比标准琼脂糖更低的温度下熔化和凝固。多糖链上这种替换发生的程度决定了琼脂糖熔化与凝结的确切温度。这 一特性构成
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从鼠尾或其他小样本中制备基因组DNA
原理这一简单的实验方案在成百上千的实验室被广泛应用于转基因或基因剔除小鼠的基因型鉴定以及从小量培养的细胞或组织块中提取 DNA。材料与仪器蛋白酶 K 培养的细胞
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从96孔微培养板生长的哺乳动物细胞中分离DNA
原理本方案由 Ramirez-solis 等的方法 1992,1993 改进而成,是一种从微培养板的每个孔生长的真核细胞抽提基因组 DNA 的简便有效的方法。每
96孔微培养板 DNA -
用甲酰胺从哺乳动物细胞中分离高分子质量DNA
原理本方案是 Kupiec 等所述方法(1987) 的改良版本,包括用蛋白酶 K 消化细胞和组织,用高浓度甲酰胺分离 DNA-蛋白质复合物(染色质用火棉胶袋充分
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用蛋白酶K和苯酚从哺乳动物细胞中分离高分子质量DNA
原理这一程序改自最先由 Daryl Stafford 及其同事描述的方法(Blin and Stanfford 1976)。 当需要大量哺乳动物 DNA,如用于
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用一步法从细胞和组织中同时制备DNA、RNA和蛋白质
原理同 Chomczynski 和 Sacchi 两人于 1987 年报道的 RNA 快速提取法一样,这种方法包括用含异硫氰酸胍和酚的一种单相液来裂解细胞。加入
DNA RNA 蛋白质 -
用碱性磷酸酶进行DNA片段的去磷酸化
材料与仪器牛小肠碱性磷酸酶 虾碱性磷酸酶 蛋白酶 K 限制性内切核酸酶 DNA 样品氯仿 EDTA 乙醇 酚 氯仿 SDS 醋酸钠 TE Tris-Cl CIP
DNA 去磷酸化 -
用T4噬菌体DNA聚合酶标记双链DNA的3'端
材料与仪器限制性内切核酸酶 T4 噬菌体 DNA 聚合酶 模板 DNA醋酸氨 乙醇 酚 氯仿 T4 噬菌体 DNA 聚合酶缓冲液 dNTP 溶液Sephadex
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微核实验在染色体水平检测DNA损伤实验
材料与仪器步骤一、材料1. 胞质分裂阻滞微核试验2. 微核的着丝点检测(1)从硬皮病 C R E S T 亚型的患者中取得的血清样本。(2) F I T C 标
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单细胞测序实验之——单细胞悬液制备
简介说到单细胞测序,大家都比较关心样本送到实验室后需要经过怎样的处理才能正式上机测序,今天就带大家了解下测序最关键的第一步——单细胞悬液制备。一般肿瘤组织比较容
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从全血中纯化基因组 DNA 实验方法
材料与仪器乙醇 异丙醇 RNA 酶 A 全血琼脂糖凝胶电泳 离心管 Wizard 基因组 DNA 纯化试剂盒步骤一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂乙醇,70%,室
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以硅膜为基础分离基因组 DNA 实验
材料与仪器PBS Na2 HP04 KH2PO4 NaCl KC1 消化液 MasterMix 蛋白酶 K自动定位器 P250 盒装吸头 平板密封条 Vac-M
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