植物组织中可溶性糖含量的测定

可溶性糖多是带有甜味的一些糖，如葡萄糖、果糖、蔗糖、麦芽糖等。可溶性糖含 量是果实品质的一项重要指标，果实成熟过程中可溶性糖含量增加。可溶性糖也是植物细胞 渗透调节物质之一，干旱条件下植物组织中可溶性糖含量增加。测定可溶性糖含量可用于分 析果实品质，了解植物的生理状况。本实验目的在于掌握蔥酮比色法测定可溶性糖含量的原 理和方法。

原理

植物组织中可溶性糖含量的测定的基本原理是糖(sugar)在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛 或羟甲基糠醛与蔥酮脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色，其吸收峰为625 nmo在一定 范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比, 故可用于糖的定量测定。

材料与仪器

材料：各种植物组织，如根、茎、叶、果实、种子等。

器材：分光光度计，天平，水浴锅，离心机或漏斗，具塞刻度试管，容量瓶，移液管等。

试剂：

①80% 乙醇

②100μg·mL-1标准葡萄糖溶液：准确称取烘干至恒重的葡萄糖 100 mg, 用 80% 乙醇溶解后定容至1 000 mL

③蔥酮试剂：称取蔥酮0.1 g溶于100 mL硫酸溶液（将76 mL相对密度为1.84的浓硫酸用蒸馅水稀释到100 mL）, 贮于棕色瓶，当日配制使用。

步骤

植物组织中可溶性糖含量的测定的基本过程可分为如下几步：

1. 标准曲线的制作：取7支大试管，按表52-1添加试剂，立即摇匀，盖上盖子，在沸水浴中 煮沸10 min, 取出冷却至室温，用0管调零，在625 nm波长下比色。以标准葡萄糖含量作横 坐标，以吸光度值作纵坐标，绘制标准曲线。

表52-1标准曲线制作加样表

2. 样品提取：将植物组织烘干、粉碎，准确称取50〜250 mg, 放入具塞刻度试管中，加 80% 乙醇10〜15 mL, 沸水浴提取30 min。离心后收集上清液，其残渣再加80% 乙醇10〜 15 mL重复提取2次，合并上清液。如是绿色组织，提取液需加少量活性炭于70笆下脱色、过 滤•定容至50 mL待测。如为鲜样，称取0.5-1 g, 加少许石英砂研磨成匀浆，连同残渣一起 用蒸馅水定容至100 mL, 室温下浸提30〜60 min, 其间经常摇动，离心或过滤，弃去残渣，测 前适当稀释。

3. 样品测定：吸取1 mL提取液于大试管中，加入5 mL蔥酮试剂，摇匀，用上述同样方 法，在625 nm处比色，记录吸光度值，从标准曲线上查出提取液中的可溶性糖含量。

4 . 结果计算：

可溶性糖含量=我貞><1。。％

式中：一从标准曲线上査得的蔗糖浓度，卩 g.mL-1 ；

V—样品总体积，mL；

W—样品重，mg。

注意事项

1. 提取可溶性糖所剩残渣放在 80°C 烘箱中烘干，可用于测定淀粉和纤维素。

2. 由于蔥酮试剂与糖反应的呈色强度随时间变化，故必须在反应后立即在同一时间比色。