蛋白的裂解与提取方法步骤

这是偶整理的蛋白裂解和提取的protocol，希望对大家有所帮助。 10ml 三去污裂解液配方如下： 50 mmol/L Tris-cl (pH 8.0)： 0.07882g 150 mmol/L NaCl： 0.08775g 0.2 g/L叠氮钠： 0.002g 1 g/LSDS 0.01g 100 mg/L Aprotin 0.001g 10 g/L NP-40 0.1g 5 g/L去氧胆酸钠 0.05g 100 mg/L 苯甲基磺酰氟(PMSF) 0.001g 总蛋白 抽提程序： 1.PBS洗细胞3 次 2.加入裂解 缓冲液 （1.5x106个细胞大约加入100µL 裂解液，或100ml细胞瓶中加入100µL 裂解液）， 冰上放置20min 3.收集裂解液 4.离心，12000转，2~10min 5.吸取上清，蛋白定量，分装，保存在-80度备用