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DNA 序列分析技术
原理本节描述运用Perkin-Elmer 公司的373 和377 型全自动DNA 测序仪进行双链DNA 测序的方法。热循环测序反应使用 Applied Bios
2024-06-13 26 -
质粒的制备（构建载体）
原理在pH 12.0 ~ 12.6碱性环境中，细菌的线性大分子量染色体DNA变性分开，而共价闭环的质粒DNA虽然变性但仍处于拓扑缠绕状态。将pH调至中性并有高盐
2024-06-13 21 -
测定用乙醇固定的 DNA 的含量
原理DNA和RNA在260nm处有一很高的吸收峰，利用这个原理我们测其OD260，再推算出其浓度。材料与仪器细胞样品PBS缓冲液 70%乙醇 PI液离心机 恒温
2024-06-13 19 -
基因克隆：高效感受态细胞制作
原理主要原理是通过电击法或CaCl2、RbCl(KCl)等化学试剂处理，使细胞膜的通透性发生暂时性的改变，成为能允许外源DNA分子进入的感受态细胞。因RbCl法
2024-06-13 21 -
目的基因的亚克隆
原理亚克隆的基本过程包括：(1)目的DNA片段和载体的制备；(2)目的DNA片段和载体的连接；(3)连接产物的转化；(4)重组子筛选。材料与仪器E.coli J
2024-06-13 25 -
重组质粒的连接、转化及筛选
原理用特定的限制性内切酶切割载体DNA和外源DNA片段并进行纯化，于体外使两者相连接(若用T-载体，可直接用纯化的PCR产物进行连接)，转化宿主细菌后，利用蓝白
2024-06-13 20 -
转染细胞的稳定筛选实验
原理外源基因转染真核细胞后整合入基因组DNA，能够长期存在于细胞中，随染色体复制而传给子代。外源基因进入培养细胞一般要经过几天才能够整合入基因组DNA。材料与仪
2024-06-13 23 -
亚硫酸氢盐修饰后测序法检测甲基化（DNA甲基化）
原理重亚硫酸盐使DNA中未发生甲基化的胞嘧啶脱氨基转变成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶保持不变，用PCR扩增（引物设计时尽量避免有CpG，以免受甲基化因素的影响）所需
2024-06-13 24 -
多药抗药基因的表达实验（PCR扩增法）
原理大多MDR细胞膜上出现MDR-1基因及其基因产物P-糖蛋白过度表达。 多药抗药基因的表达实验是通过反转录和PCR的方法来检测这些特定基因的过度表达。材料与仪
2024-06-13 33 -
核酸纯度、浓度与分子量测定实验（Ethidium bromide染色法）
原理利用一系列不同浓度的DNA标准溶液（0、2.5、5、10、20、30、40、50 ng/ml），或已知浓度的DNA marker，和未知浓度DNA样品一起进
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核酸纯度、浓度与分子量测定实验（紫外分光光度法）
原理溴化乙锭是一种荧光染料，在凝胶电泳中，EB分子可嵌入核酸双链的碱基对之间，在紫外线激发下发出荧光，其强度与DNA量成正比。同时核酸最大吸收波长在260 nm
2024-06-13 26 -
微生物液体培养实验（细菌培养的检测）
材料与仪器细菌显微镜 玻片 盖玻片 滴管步骤一、利用计数板检测 1. 用一片干净的盖玻片盖住一片干净的计数玻片或者petraff-Hausser小室，参见下面
2024-06-13 20 -
微生物液体培养实验（大体积培养法）
材料与仪器细菌胰化蛋白胨 酵母提取物 氯化钠 NaOH接种针 培养瓶 摇床步骤1. 按1：100的比例将过夜培养物加入到一个无菌烧瓶中，烧瓶的体积应该是培养液
2024-06-13 24 -
微生物液体培养实验（过夜培养法）
材料与仪器细菌胰化蛋白胨 酵母提取物 氯化钠 NaOH接种针 培养瓶 摇床步骤1. 取5 ml 液体培养基加入一支无菌的16 mm 或18 mm 的培养试管中
2024-06-13 30 -
微生物固体培养实验（涂布法）
材料与仪器细菌涂布棒 培养箱 培养皿步骤一、实验准备 1. 涂布棒 （1）加热并弯曲一支直径4 mm 的玻璃管或巴斯德吸管制备涂布棒。（2）灭菌，将涂布棒的三
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