黏粒文库的扩增和贮存(在滤膜上扩增)
原理应用此种扩增方法，文库不容易失真，这是由于在任何一步骤中，含有不同重组黏粒的混合菌群都不会在生长中发生竞争。但扩增过程冗长，而且有时由于主滤膜保 存后菌落不
原理
应用此种扩增方法，文库不容易失真，这是由于在任何一步骤中，含有不同重组黏粒的混合菌群都不会在生长中发生竞争。但扩增过程冗长，而且有时由于主滤膜保 存后菌落不再生长而丢失。本节还提供一种备选方法，即在 TB 平板上扩增。该备选扩增方案使那些生长不良的黏粒克隆易于丢失。
材料与仪器
λ 噬菌体包装反应 大肠杆菌接种菌株
卡那霉素 TB 琼脂平板 TB 培养基 无去污剂、无菌的硝酸纤维素膜或尼龙滤膜
卡那霉素 TB 琼脂平板 TB 培养基 无去污剂、无菌的硝酸纤维素膜或尼龙滤膜
步骤
一、材料
1. 培养基
含 25 μg/ml 卡那霉素 TB 琼脂平板（150 mm)
TB 培养基
2. 专用设备
无去污剂、无菌的硝酸纤维素膜或尼龙滤膜（137 mm）。
3. 载体和菌株
λ 噬菌体包装反应
适宜的大肠杆菌接种菌株（如 XLl-Blue、ED8767、NM554、DH5αMCR)
二、方法
预培养
1. 计算能产生 3 万~ 5 万个转化的菌落的包装反应体积。
2. 取若干无菌试管，向每管中加入 0.2 ml 接种细菌，接着加入包装反应液并使其达到步骤 1 确定的体积。
3. 将试管在 37℃ 温育 20 min。
4. 各管中分别加入 0.5 ml TB, 继续温育 45 min。
在滤膜上扩增
5. 将标上编号的无菌滤膜铺在数个含 25 μg/ml 卡那霉素的 150 mm TB 琼脂平板上（滤膜数量与步骤 2 中试管数相同）。
6. 用无菌涂布棒将每支试管内容物涂在琼脂平板上的滤膜表面。待接种物被滤膜吸收后，将平板移至 37℃ 温箱放置数小时至过夜（12~15 h)。
7. 制作每个主滤膜的影印滤膜，-70℃ 保存。
8. 筛选文库时，融化影印滤膜，裂解滤膜上的克隆，然后进行与标记探针的杂交。
1. 培养基
含 25 μg/ml 卡那霉素 TB 琼脂平板（150 mm)
TB 培养基
2. 专用设备
无去污剂、无菌的硝酸纤维素膜或尼龙滤膜（137 mm）。
3. 载体和菌株
λ 噬菌体包装反应
适宜的大肠杆菌接种菌株（如 XLl-Blue、ED8767、NM554、DH5αMCR)
二、方法
预培养
1. 计算能产生 3 万~ 5 万个转化的菌落的包装反应体积。
2. 取若干无菌试管，向每管中加入 0.2 ml 接种细菌，接着加入包装反应液并使其达到步骤 1 确定的体积。
3. 将试管在 37℃ 温育 20 min。
4. 各管中分别加入 0.5 ml TB, 继续温育 45 min。
在滤膜上扩增
5. 将标上编号的无菌滤膜铺在数个含 25 μg/ml 卡那霉素的 150 mm TB 琼脂平板上（滤膜数量与步骤 2 中试管数相同）。
6. 用无菌涂布棒将每支试管内容物涂在琼脂平板上的滤膜表面。待接种物被滤膜吸收后，将平板移至 37℃ 温箱放置数小时至过夜（12~15 h)。
7. 制作每个主滤膜的影印滤膜，-70℃ 保存。
8. 筛选文库时，融化影印滤膜，裂解滤膜上的克隆，然后进行与标记探针的杂交。
