毛细管电泳法分析单链构象多态性实验（基本方案3 应用ABI PRISM 3100基因分析仪的自动化毛细管芯片电泳）

PCR 产物 5% 非变性引物
10 X 基因分析仪缓冲剂 Milli-Q 级别的超纯水
ABI PRISM 3100 基因分析仪 基因扫描毛细管芯片

1.安装一个 16 通道的芯片（50 cmi.d.) 使之与探头距离 36 cm。根据制造商说明书将设备做好正常运行的准备。吸管内吸入 5% 非变性引物，在缓冲腔内注人 IX 基因分析仪缓冲剂。准备样品板。将管放入样本槽。

2.在 18°C、25°C 和 35°C 运用三种运行组件运行毛细管电泳，使用以下参数。

加入时间：IOs

加入电压：3kV

运行电压：53kV

运行时间：25 min

使用设置为 D 的滤光镜检测 FAM、HEX、ROX 指示。

3.根据制造商说明书使用基因扫描分析软件分析结果。对每一个电泳温度设定一个大小标准。这些标准里的峰值是由扫描点除以 10 来确定的（扫描点为 3550 的峰值是 355)。使用 DNA 固有的大小标准来校准这些峰值。将未知样本与具有已知 DNA 序列的正常样本比较。另外也可以根据制造商说明书使用基因分型软件执行自动化数据分析。

4.用未标记的引物再次放大具有分离的峰值或异常的色移的样本，并且通过 DNA 测序检测突变（单元 7.5)。