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DNA实验

Southern印迹技术

2024-05-18 DNA实验 加入收藏
简介印迹杂交是指将待测核酸片段结合到一定的固相支持物上,然后与存在于液相中的标记探针进行杂交的过程。Southern印迹技术(Southern blot)是将D

简介

印迹杂交是指将待测核酸片段结合到一定的固相支持物上,然后与存在于液相中的标记探针进行杂交的过程。Southern印迹技术(Southern blot)是将DNA转移到固相支持物上,然后与存在于液相中的标记探针进行杂交的过程。

Southern印迹技术可检测特定大小DNA分子的含量,常用于克隆基因的酶切图谱分析、基因组基因的定性及定量分析、基因突变分析及限制性长度多态性分析(RELP)等。

原理

Southern印迹技术的基本原理是首先将限制性核酸内切酶消化的DNA片段经凝胶电泳分离,然后使凝胶上的DNA变性,并在原位将单链DNA片段转移至硝酸纤维素膜或其他固相支持物上。

通过用放射性同位素标记特异的DNA探针,与单链DNA片段进行杂交反应,经放射性自显影,分析杂交信号,确定与探针互补的每条DNA带的位置,从而可以确定在众多酶解产物中含某一特定序列的DNA片段的位置和大小。

应用

Southern印迹技术可检测特定大小DNA分子的含量,常用于克隆基因的酶切图谱分析、基因组基因的定性及定量分析、基因突变分析及限制性长度多态性分析(RELP)等。


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