变性凝胶电泳实验(电解质梯度测序胶)
原理通过简单地提高下槽缓冲液的盐浓度,使凝胶底部的离子強度得以提高,在电泳过程中,盐离子可以电泳进入凝胶并产生重复性好的及有效的梯度。材料与仪器DNATBE 乙
原理
通过简单地提高下槽缓冲液的盐浓度,使凝胶底部的离子強度得以提高,在电泳过程中,盐离子可以电泳进入凝胶并产生重复性好的及有效的梯度。
材料与仪器
DNA
TBE 乙酸钠
电泳仪
TBE 乙酸钠
电泳仪
步骤
1. 按基本方案步骤1~22灌制凝胶及进行预电泳,但上槽缓冲液为0.5×TBE,下槽为1×TBE。
2. 按基本方案步骤23~26步准备样品及加样。
2. 按基本方案步骤23~26步准备样品及加样。
3. 如需测≤400碱基的序列信息,加入3 mol/l 乙酸钠于下槽缓冲液至终浓度1 mol/l, 执行步骤5。
4. 如果需测大于400碱基的序列信息,先按步骤5进行,电泳2~3 h,然后加入3 mol/l 乙酸钠于下槽至终浓度为1 mol/l。
5. 在60 W 恒功率下电泳。
6. 进行基本方案步骤23~33。