酿酒酵母感受态细胞的制备、转化

酿酒酵母感受态细胞的制备

（1）从YPD平板上挑取一个新鲜的酿酒酵母EBY100单克隆至10 ml YPD液体培养基，30℃，250 rpm 培养过夜。

（2）测定过夜培养物的OD600值为3.0~5.0之间。

（3）将10 ml YPD过夜培养物稀释至OD600值为0.2~0.4。

（4）在28~30℃摇床中继续培养3~6 hr，使其OD600值达到0.6~1.0。

（5）于室温1500 g 离心5 min 收集酵母细胞，弃上清。

（6）用10 ml 洗液洗酵母细胞，随后于室温1500 g 离心5 min离 心收集细胞，弃上清。

（7）用1 ml TE/LiAc重悬酵母细胞，以每管50 μl 分装。

酿酒酵母细胞的转化

（1）取50 μl 感受态细胞，再加入待转质粒各2 μl，混匀。

（2）加入500 μl 转化用溶液（PEG/LiAc，二甲亚砜），弹击管壁混匀。

（3）30℃水浴1 h，隔15min弹击管壁混匀。

（4）加入1毫升YPD培养液，30℃摇床培养1小时。

（5）3500 g 离心5 min ，留沉淀，弃上清。

（6）沉淀用150 μl TE重悬，涂相应的SD平板；将平板倒置于30℃培养。