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DNA实验

DNA片段纯化与回收常见问题分析

2024-10-15 DNA实验 加入收藏
Q:利用凝胶回收试剂盒DNA回收效率较低或者未回收到目的片段?A:可能有以下几个原因:1. 胶块未完全溶解,可适当延长水浴时间,并增加上下颠倒次数辅助溶解;2.

Q:利用凝胶回收试剂盒DNA回收效率较低或者未回收到目的片段?

A:

可能有以下几个原因:

1. 胶块未完全溶解,可适当延长水浴时间,并增加上下颠倒次数辅助溶解;

2. 胶块体积太大,应先将其切为小块,分多次回收;

3. 电泳缓冲液pH太高,硅基质膜在高盐低pH结合DNA,如pH太高,应作适当调整;

4. 漂洗液中未加入无水乙醇。

Q:能否改用去离子水洗脱?

A:可以。但是实验室所用纯水一般pH偏低,可利用NaOH适当调高其pH值,以增加洗脱得率。

Q:回收DNA进行后续酶切实验?

A:洗脱产物含有残留的乙醇会影响酶切,请确保彻底去除漂洗缓冲液,具体方法参见回收效率低的解决方案。

Q:可否使用更小洗脱体积(小于说明书提供的最小洗脱体积)进行洗脱以提高浓度?

A:不可以。因为说明书提供的最少洗脱体积是能完全覆盖吸附膜的最小体积,若减少体积则不能将DNA完全洗脱下来。

Q:电泳检测只有一条目的带,可否选用凝胶回收试剂盒?

A:可以。如果后续实验对片段纯度要求较高,建议即使只有一条带,也可以切胶纯化,其回收得到片段的纯度可能要比直接回收高一些。

Q:琼脂糖凝胶胶块不溶?

A:1. 琼脂糖质量不好。2. 含目的片段的凝胶再空气中放置过久,使胶块失水、干燥,建议切胶后立即进行回收或将胶块保存在4℃或-20℃。3. 制胶的电泳缓冲液浓度过高或陈旧。


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