细胞培养环境主要要求:无菌无毒。
创造局部无菌最简便的方法:使用超净工作台或生物安全柜。
细胞无菌室要求:
①密封的房间、有空调过滤机组和通风系统
②有更衣室、风淋室、缓冲间
③无菌室使用前后需经过紫外灯辐照30分钟消毒杀菌
④人员、物品进入无菌室也需相应的消毒处理
根据空气洁净度不同,无菌室分为百级、千级、万级、十万级和三十万级。根据2010版GMP规定,无菌室分为A级、B级、C级、D级。细胞培养过程中常用设备:
电子天平
结构简单,称量的原理和秤原理是一样的,和秤不同的是,电子天平量程小,精准度高。
PH计
结构由机体和电极笔构成;电极笔内部参比液是3mol/L的氯化钾,保护液是饱和氯化钾溶液。
纯水机
由过滤柱、反渗透膜、数显控制板组成,纯水机可制得蒸馏水和超纯水。
高温高压灭菌锅
灭菌原理:密闭环境,加热产生水蒸汽,锅内冷空气经排气阀排出后,关闭排气阀,由于水蒸汽无法排出,锅内压力增加,沸点升高,形成高温环境,菌体蛋白质变性,从而达到灭菌的效果。
二氧化碳培养箱
结构:与普通生化培养箱相比,增加了密封性,通入CO2气体。CO2气体由外接气瓶连接。
注意事项:
①气瓶上有两个气压表,右边气压表是指气瓶内压力,左边气压表是进入到培养箱内气压。
②培养箱参数是设置好的,分别是37℃,5%CO2。
③培养箱内有饱和硫酸铜溶液水盆,应定期加入无菌水,定期更换饱和硫酸铜溶液。
倒置显微镜
结构:倒置显微镜与普通的光学显微镜在结构上相反,光圈在上面,物镜在载物台下面。
使用步骤:
①打开电源开关,调节光圈亮度
②避开物镜用酒精棉球擦拭载物台
③培养瓶或培养皿可以直接放在载物台上观察细胞
④使用结束后,光圈调至最暗,关上电源,盖上防尘布。
超净工作台
超净工作台仅适于制备培养基和其他无菌试剂及培养非灵长类细胞
根据气流方向分为水平流超净工作台和垂直流超净工作台,我们实验室使用的超净工作台是垂直流超净工作台。
生物安全柜
根据气流方向和排风系统分为三级生物安全柜,实验室使用的是2级生物安全柜。
生物安全柜和超净工作台的区别:
生物安全柜能够完全保护工作人员、样品并防止交叉污染的发生;
超净工作台只是保护操作对象而不保护工作人员和实验室环境的洁净工作台。
液氮罐
液氮罐一般分为液氮贮存罐和液氮运输罐。
主要用于低温贮藏细胞和菌株冻存管,液氮温度低至-196℃,使用过程需做好防护措施。
超低温冰箱
本实验室超低温冰箱主要用于细胞、菌株冻存及短期保藏,设置温度为-80℃,高温报警温度为-73℃,低温报警温度为-85℃。